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pumpkin236

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】MTT实验,24孔板接种细胞的一些疑惑已有13人参与

各位牛人,初涉实验时又遇到一个问题向大家请教
   准备 做细胞的MTT加药实验。用的是24孔板,但是种板后发现,细胞长的十分之不均匀,前一天下午种的板,第二条上午板孔中间长的就很密,几乎达90%,而周围十分之稀疏。请教大家,怎样在种板时让细胞在板孔中分布的均匀一点,给点切实可行的建议吧
   还有,在做MTT时,一般接种密度接种多少?我们实验室有这样接种的,可以不计数,比如T25的培养瓶长满细胞以后,在消化后,加2.5ml培养基吹打成细胞悬液,24孔板每个孔先加900微升的培养基,然后再每个板孔接种80-100微升的细胞 悬液。我试过这个方法,发现分布也有点不均!大家还有没有什么更好的方法?
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ndwzf

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
NCI有推荐浓度,不同的细胞浓度不同。另,用96孔板较好。
3楼2010-09-28 18:56:44
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magiccat

木虫 (正式写手)

10的6次方/mL 不过应该用96孔板吧,要不怎么上酶标仪检测呢
2楼2010-09-28 11:51:04
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ndwzf

铁虫 (小有名气)

想绝对均匀是不现实的
4楼2010-09-28 18:57:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-09-28 22:50:37
不是没摇匀就是孔板底部不均匀~~质量次的就这样
不过,96孔板是越摇越不容易均匀的……………………

接种密度看你的实验需求~~一般40%~60%
就算你不计数,也至少种下去之后看一眼是不是合适嘛……………………不均匀跟接种密度没多大关系
5楼2010-09-28 21:36:47
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