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冷月5565

木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】六孔板接种细胞系,最大细胞数能达到三百万吗?已有4人参与

最近要做caspase-3凋亡检测,现在的产品一般都要求细胞数在二百万到五百万之间。我的学长曾用六孔板铺板来做,实验结果总是不对头。难道是六孔板的细胞数达不到要求?
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-07-26 17:18:18
冷月5565(金币+2): 2010-07-26 17:23:04
密到堆起来了……不大可能,撑死了5次方
Cas-3活性强烈推荐买promega的试剂盒,灵敏度太变态了,我减半使用读数都很高
不过需要能测生物发光的酶标仪
另外,96孔板即可完成,大概4次方个细胞
2楼2010-07-26 17:17:38
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冷月5565

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-26 17:17:38:
密到堆起来了……不大可能,撑死了5次方
Cas-3活性强烈推荐买promega的试剂盒,灵敏度太变态了,我减半使用读数都很高
不过需要能测生物发光的酶标仪
另外,96孔板即可完成,大概4次方个细胞

就是分光光度那种活性检测方法?
像碧云天、clontech那些试剂盒要用200万的细胞,是不是都要用25cm瓶来养?

[ Last edited by 冷月5565 on 2010-7-26 at 17:23 ]
3楼2010-07-26 17:22:57
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烟大考研

金虫 (正式写手)

冷月5565(金币+1): 2010-07-26 18:25:49
我们做的CHO可以达到1.5*10E6,达到3*10E6,应该没问题,不过细胞密度比较大,需要勤换液,可以达到的
心信其可行,则移山填海之难,终有成功之日;心信其不可行,则反掌折枝之易,亦无收效之期
4楼2010-07-26 17:35:55
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烟大考研

金虫 (正式写手)

细胞计数我们采用细胞计数仪,台盼蓝染色,达到过1.5*10E6,不过要非常小心,换液不及时,容易引起细胞老化
心信其可行,则移山填海之难,终有成功之日;心信其不可行,则反掌折枝之易,亦无收效之期
5楼2010-07-26 17:37:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

冷月5565(金币+2): 2010-07-26 19:03:14
引用回帖:
Originally posted by 冷月5565 at 2010-07-26 17:22:57:

就是分光光度那种活性检测方法?
像碧云天、clontech那些试剂盒要用200万的细胞,是不是都要用25cm瓶来养?

[ Last edited by 冷月5565 on 2010-7-26 at 17:23 ]

是的,promega是一步法测的,就是诱导凋亡之后,按照培养基体积1:1加入检测试剂,孵育1h之后测就得到数值了
不需要通过收蛋白之类的来弄,这得搞半天呢
当然Promega的试剂盒就很贵啦,但是为了数据,值~~~
6楼2010-07-26 18:48:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by 烟大考研 at 2010-07-26 17:35:55:
我们做的CHO可以达到1.5*10E6,达到3*10E6,应该没问题,不过细胞密度比较大,需要勤换液,可以达到的

这样细胞状态很容易不好的……尤其是做药物的实验,细胞密度跟耐药性的关系很大
7楼2010-07-26 18:48:48
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烟大考研

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-26 18:48:48:


这样细胞状态很容易不好的……尤其是做药物的实验,细胞密度跟耐药性的关系很大

1.5*10E6的细胞状态还是不错的,但是再翻一倍就没有做过了,不敢妄言,不过还是可是试试看的,呵呵
心信其可行,则移山填海之难,终有成功之日;心信其不可行,则反掌折枝之易,亦无收效之期
8楼2010-07-26 18:56:18
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FZL_1122

金虫 (小有名气)

冷月5565(金币+1): 2010-08-04 19:58:28
我个人认为,如果细胞状态好,6孔板的细胞数应该是可以满足实验要求的。
我的最初养的细胞状态非常好,传代后很快铺满孔板,血球计数可以达到试验要求,但传代次数过多,或是培养不经心,使细胞老化或受损,会直接影响试验结果。
当然,试剂盒也有不同。一分钱一分货。
GOODlUCK!
9楼2010-07-26 19:26:00
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冷月5565

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-26 18:48:05:


是的,promega是一步法测的,就是诱导凋亡之后,按照培养基体积1:1加入检测试剂,孵育1h之后测就得到数值了
不需要通过收蛋白之类的来弄,这得搞半天呢
当然Promega的试剂盒就很贵啦,但是为了数据,值~~~

http://www.promega.com.cn/Produc ... tail&Pro_ID=379
是这个吗?
还是这个?http://www.promega.com.cn/Produc ... amp;PostType=Detail

[ Last edited by 冷月5565 on 2010-7-26 at 19:53 ]
10楼2010-07-26 19:51:08
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