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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】六孔板接种细胞系，最大细胞数能达到三百万吗？
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冷月5565

木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】六孔板接种细胞系，最大细胞数能达到三百万吗？ 已有4人参与

最近要做caspase-3凋亡检测，现在的产品一般都要求细胞数在二百万到五百万之间。我的学长曾用六孔板铺板来做，实验结果总是不对头。难道是六孔板的细胞数达不到要求？
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1楼 2010-07-26 17:12:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-07-26 17:18:18
冷月5565(金币+2): 2010-07-26 17:23:04
密到堆起来了……不大可能，撑死了5次方
Cas-3活性强烈推荐买promega的试剂盒，灵敏度太变态了，我减半使用读数都很高
不过需要能测生物发光的酶标仪
另外，96孔板即可完成，大概4次方个细胞
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2楼2010-07-26 17:17:38
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冷月5565

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-26 17:17:38:
密到堆起来了……不大可能，撑死了5次方
Cas-3活性强烈推荐买promega的试剂盒，灵敏度太变态了，我减半使用读数都很高
不过需要能测生物发光的酶标仪
另外，96孔板即可完成，大概4次方个细胞

就是分光光度那种活性检测方法？
像碧云天、clontech那些试剂盒要用200万的细胞，是不是都要用25cm瓶来养？

[ Last edited by 冷月5565 on 2010-7-26 at 17:23 ]
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3楼2010-07-26 17:22:57
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烟大考研

金虫 (正式写手)
冷月5565(金币+1): 2010-07-26 18:25:49
我们做的CHO可以达到1.5*10E6，达到3*10E6，应该没问题，不过细胞密度比较大，需要勤换液，可以达到的
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
4楼2010-07-26 17:35:55
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烟大考研

金虫 (正式写手)
细胞计数我们采用细胞计数仪，台盼蓝染色，达到过1.5*10E6，不过要非常小心，换液不及时，容易引起细胞老化
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
5楼2010-07-26 17:37:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
冷月5565(金币+2): 2010-07-26 19:03:14
引用回帖:
Originally posted by 冷月5565 at 2010-07-26 17:22:57:

就是分光光度那种活性检测方法？
像碧云天、clontech那些试剂盒要用200万的细胞，是不是都要用25cm瓶来养？

[ Last edited by 冷月5565 on 2010-7-26 at 17:23 ]

是的，promega是一步法测的，就是诱导凋亡之后，按照培养基体积1：1加入检测试剂，孵育1h之后测就得到数值了
不需要通过收蛋白之类的来弄，这得搞半天呢
当然Promega的试剂盒就很贵啦，但是为了数据，值~~~
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6楼2010-07-26 18:48:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 烟大考研 at 2010-07-26 17:35:55:
我们做的CHO可以达到1.5*10E6，达到3*10E6，应该没问题，不过细胞密度比较大，需要勤换液，可以达到的

这样细胞状态很容易不好的……尤其是做药物的实验，细胞密度跟耐药性的关系很大
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7楼2010-07-26 18:48:48
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烟大考研

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-26 18:48:48:


这样细胞状态很容易不好的……尤其是做药物的实验，细胞密度跟耐药性的关系很大

1.5*10E6的细胞状态还是不错的，但是再翻一倍就没有做过了，不敢妄言，不过还是可是试试看的，呵呵
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
8楼2010-07-26 18:56:18
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FZL_1122

金虫 (小有名气)
冷月5565(金币+1): 2010-08-04 19:58:28
我个人认为，如果细胞状态好，6孔板的细胞数应该是可以满足实验要求的。
我的最初养的细胞状态非常好，传代后很快铺满孔板，血球计数可以达到试验要求，但传代次数过多，或是培养不经心，使细胞老化或受损，会直接影响试验结果。
当然，试剂盒也有不同。一分钱一分货。
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GOODlUCK!
9楼2010-07-26 19:26:00
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冷月5565

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-26 18:48:05:


是的，promega是一步法测的，就是诱导凋亡之后，按照培养基体积1：1加入检测试剂，孵育1h之后测就得到数值了
不需要通过收蛋白之类的来弄，这得搞半天呢
当然Promega的试剂盒就很贵啦，但是为了数据，值~~~

http://www.promega.com.cn/Produc ... tail&Pro_ID=379
是这个吗？
还是这个？http://www.promega.com.cn/Produc ... amp;PostType=Detail

[ Last edited by 冷月5565 on 2010-7-26 at 19:53 ]
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10楼2010-07-26 19:51:08
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