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【求助/交流】关于MTT检测淋巴细胞活性的若干问题，请教各位大侠~~ 已有8人参与
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最近在做MTT的实验，有些问题想请教各位，先谢谢大家了~~~ 另外不知道我的帖子有没有重复，但这是我自己做的实验，有自己碰到的问题，望大家帮帮小菜。。 1、染毒然后要离心去培养液，但我发现2000转并不能是细胞完全沉到板底，有些孔还是悬着？另外，大家是用什么方法除去培养液的？我发现如果直接倒或者用移液枪吸的话，都会有误差。 2、最后用酶标仪检测的波长是490nm还是570nm？参考波长是什么意思？ 3、调零孔和对照孔的作用是什么？最后的结果怎么表示？ 4、一般检测出来的OD值在什么范围比较可信？如果低了，是不是表示每孔加的细胞数太少了，一般一个空要多少个左右？ 5、还有我的反应体积是100μL（培养基40+细胞悬液50+毒素10），有影响么？有些人用的是200μL。 6、MTT配置是，不用过滤关系大不大？ [ Last edited by hcming on 2010-9-13 at 18:31 ] |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+10):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:41:12
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scelab(金币+10):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:41:12
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1.染毒后一般不离心，这样很麻烦，而且误差相比会更大。我们一般都是用枪吸，吸的时候要慢，注意下面的结晶紫！ 2.对于DMSO，溶解后呈紫（红）色，490nm有最大吸收值；而对于SDS和酸化异丙醇，则选用570nm。 3.调零孔的作用是因为每一列的板子都存在误差，所以我们在每一列平行样的下面都设置一个调零孔，这样的话，用酶标仪测的时候，它就可以将你每一列的板子进行综合，这样做可以减少误差。 4.MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系。收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。 5.只要MTT工作浓度为5 mg/ml，即0.5%MTT，反应体积是100还是200，应该无所谓，不过这样的话，你的细胞可能长得慢点，少点。 6.不过滤不行，MTT对细菌非常敏感，我刚做的时候，调零孔的吸光值都很大，后来我在显微镜下发现就是因为染菌，里面有紫色结晶。 |
2楼2010-09-13 18:46:58
3楼2010-09-13 19:17:02
4楼2010-09-15 20:53:08
dhd997
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