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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 【求助/交流】悬浮细胞附着壁底的问题 K562
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】悬浮细胞附着壁底的问题 K562已有4人参与

据养悬浮细胞朋友的经验介绍，有部分细胞附着在瓶壁是正常的，可是我的细胞大多是附着在壁底的！这是不是说明细胞出了问题？直接吹打是可以吹打下来的。
另外，如何判断悬浮细胞长满呢？我最近都是根据培养液颜色判断的，有点变黄时就传代。同时我的细胞大多附在壁上了，几乎贴满时我也要传代。我状的是K562细胞。谢谢！

[ Last edited by 蜗牛VS蜗牛 on 2010-9-18 at 09:09 ]
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1楼2010-09-18 09:07:31
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lovetanyang

银虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1):鼓励一下！ 2010-09-18 19:58:03
根据培养基的颜色判断是非常不合理的一种传代方式，当培养基变黄时，营养已经收到了影响，特别严重的是细胞生长受到抑制，对于你的实验影响比较大。合理的办法是采用计数的方法，控制细胞的密度，在达到一定密度时立即进行传代，这样才能维持细胞的正常生长。
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2楼2010-09-18 09:42:05
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lovetanyang at 2010-09-18 09:42:05:
根据培养基的颜色判断是非常不合理的一种传代方式，当培养基变黄时，营养已经收到了影响，特别严重的是细胞生长受到抑制，对于你的实验影响比较大。合理的办法是采用计数的方法，控制细胞的密度，在达到一定密度时 ...

谢谢指点。
你说的可行，养上几代凭经验观察一下就可以了。
最开始时候的判断方式是如何的呢，什么数量才算是长满？
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3楼2010-09-18 12:18:28
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lovetanyang

银虫 (小有名气)
蜗牛VS蜗牛(金币+5):非常感谢，说的很清楚。 2010-09-18 15:59:06
引用回帖:
Originally posted by lovetanyang at 2010-09-18 09:42:05:
根据培养基的颜色判断是非常不合理的一种传代方式，当培养基变黄时，营养已经收到了影响，特别严重的是细胞生长受到抑制，对于你的实验影响比较大。合理的办法是采用计数的方法，控制细胞的密度，在达到一定密度时 ...

依照CHO细胞（悬浮培养）为例:接种密度控制在1-3×10^5cells/ml就可以，有时0.2-0.5×105cells/ml的低密度接种也是可以的，不必把密度接种很高，这样影响细胞的生长，也增加培养基的消耗和人工。当细胞的密度增加到6-10×10^5cells/ml时（通常用72hrs）就对细胞进行传代。维持低细胞密度是非常好的办法。经常计数，是掌握细胞生长规律最好的办法。
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4楼2010-09-18 15:10:32
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lovetanyang

银虫 (小有名气)
还有一点就是你说的凭经验判断细胞密度的办法，这个办法的误差非常大，即使是非常有经验的实验人员，也会产生1倍或者好几倍密度的差异，这就是说经验判断无法代替计数。计数可以控制细胞在稳定周期内传代，这种方法比传代周期不定要好的很多。
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5楼2010-09-18 15:14:01
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langzhiya

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+5): 鼓励新虫回帖！ 2011-10-03 11:00:57
其实k562细胞长的很快，贴壁越多说明细胞状态比较好，有利于实验....
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学无止境
6楼2011-10-03 10:59:37
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卡卡小西

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的也是大部分贴壁啊，也是K562，复苏的是13年3月份，一直在-80保存的 ，复苏后状态也不是很好。。。同求助，，。。。悬浮的很少啊。。。。好着急好着急，复苏了好几支都是这样啊，，是因为一直在-80保存的么？？？？
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7楼2014-03-13 15:01:28
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wkzhangchi

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 卡卡小西 at 2014-03-13 15:01:28
我的也是大部分贴壁啊，也是K562，复苏的是13年3月份，一直在-80保存的 ，复苏后状态也不是很好。。。同求助，，。。。悬浮的很少啊。。。。好着急好着急，复苏了好几支都是这样啊，，是因为一直在-80保存的么？？？ ...

你要做K562的转染么？
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8楼2014-06-09 16:15:18
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Yuga93

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
K562太多的时候就回贴壁，下次传代的时候全收起来离心，一般分冻起来，一部分传代，控制下量，要多去看
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9楼2014-06-19 21:04:45
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