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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】悬浮细胞附着壁底的问题 K562 已有4人参与

据养悬浮细胞朋友的经验介绍,有部分细胞附着在瓶壁是正常的,可是我的细胞大多是附着在壁底的!这是不是说明细胞出了问题?直接吹打是可以吹打下来的。
另外,如何判断悬浮细胞长满呢?我最近都是根据培养液颜色判断的,有点变黄时就传代。同时我的细胞大多附在壁上了,几乎贴满时我也要传代。我状的是K562细胞。谢谢!

[ Last edited by 蜗牛VS蜗牛 on 2010-9-18 at 09:09 ]
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lovetanyang

银虫 (小有名气)


amisking(金币+1):鼓励一下! 2010-09-18 19:58:03
根据培养基的颜色判断是非常不合理的一种传代方式,当培养基变黄时,营养已经收到了影响,特别严重的是细胞生长受到抑制,对于你的实验影响比较大。合理的办法是采用计数的方法,控制细胞的密度,在达到一定密度时立即进行传代,这样才能维持细胞的正常生长。
2楼2010-09-18 09:42:05
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by lovetanyang at 2010-09-18 09:42:05:
根据培养基的颜色判断是非常不合理的一种传代方式,当培养基变黄时,营养已经收到了影响,特别严重的是细胞生长受到抑制,对于你的实验影响比较大。合理的办法是采用计数的方法,控制细胞的密度,在达到一定密度时 ...

谢谢指点。
你说的可行,养上几代凭经验观察一下就可以了。
最开始时候的判断方式是如何的呢,什么数量才算是长满?
3楼2010-09-18 12:18:28
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lovetanyang

银虫 (小有名气)

蜗牛VS蜗牛(金币+5):非常感谢,说的很清楚。 2010-09-18 15:59:06
引用回帖:
Originally posted by lovetanyang at 2010-09-18 09:42:05:
根据培养基的颜色判断是非常不合理的一种传代方式,当培养基变黄时,营养已经收到了影响,特别严重的是细胞生长受到抑制,对于你的实验影响比较大。合理的办法是采用计数的方法,控制细胞的密度,在达到一定密度时 ...

依照CHO细胞(悬浮培养)为例:接种密度控制在1-3×10^5cells/ml就可以,有时0.2-0.5×105cells/ml的低密度接种也是可以的,不必把密度接种很高,这样影响细胞的生长,也增加培养基的消耗和人工。当细胞的密度增加到6-10×10^5cells/ml时(通常用72hrs)就对细胞进行传代。维持低细胞密度是非常好的办法。经常计数,是掌握细胞生长规律最好的办法。
4楼2010-09-18 15:10:32
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lovetanyang

银虫 (小有名气)

还有一点就是你说的凭经验判断细胞密度的办法,这个办法的误差非常大,即使是非常有经验的实验人员,也会产生1倍或者好几倍密度的差异,这就是说经验判断无法代替计数。计数可以控制细胞在稳定周期内传代,这种方法比传代周期不定要好的很多。
5楼2010-09-18 15:14:01
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langzhiya

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wanhscn(金币+5): 鼓励新虫回帖! 2011-10-03 11:00:57
其实k562细胞长的很快,贴壁越多说明细胞状态比较好,有利于实验....
学无止境
6楼2011-10-03 10:59:37
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卡卡小西

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的也是大部分贴壁啊,也是K562,复苏的是13年3月份,一直在-80保存的 ,复苏后状态也不是很好。。。同求助,,。。。悬浮的很少啊。。。。好着急好着急,复苏了好几支都是这样啊,,是因为一直在-80保存的么????
7楼2014-03-13 15:01:28
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wkzhangchi

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 卡卡小西 at 2014-03-13 15:01:28
我的也是大部分贴壁啊,也是K562,复苏的是13年3月份,一直在-80保存的 ,复苏后状态也不是很好。。。同求助,,。。。悬浮的很少啊。。。。好着急好着急,复苏了好几支都是这样啊,,是因为一直在-80保存的么??? ...

你要做K562的转染么?
8楼2014-06-09 16:15:18
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Yuga93

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
K562太多的时候就回贴壁,下次传代的时候全收起来离心,一般分冻起来,一部分传代,控制下量,要多去看
9楼2014-06-19 21:04:45
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