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grace415

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于悬浮细胞MTT的一点疑问,求解答!

我想要测定药物对细胞的毒性,用MTT。
请问悬浮细胞的MTT实验时,细胞接板后培养多长时间给药呢?细胞和药物的比例大概是怎样呢?例如,每孔加100μl时,细胞悬液和药物溶液各占多少?谢谢!!
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
grace415: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-26 09:55:23
引用回帖:
4楼: Originally posted by grace415 at 2012-12-24 16:15:51
嗯,我是用的MTS,就免去了离心那一步了,觉得离心比较麻烦,取上清液也怕取的参差不齐。...

那你就先按90ul细胞悬液(1000-3000细胞)铺板,24h+你药物作用时间,20ulMTS,在1-4小时摸索一下,看看490nm下的OD能不能在1附近。然后根据摸的条件做实验,铺板,24h后加药,药物作用完20%体积的MTS,然后测OD就好了,还有什么问题么?
ForDream!
6楼2012-12-24 16:46:27
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yeyu541200

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖! 2012-12-24 18:22:18
我没有养过悬浮细胞,只养过贴壁细胞,所以只能给你提提建议,给药时间我觉得悬浮的细胞应该是细胞长到60%以上,也就是你平常穿细胞的时间往前推2到3小时就行,.至于药物的浓度,你不是要测药物的毒性试验么,我感觉你最好做个梯度,一般都是10倍稀释,如果药物的毒性不大,就4倍稀释,对了,你药物得和细胞液配比哈,这样吧,给药的时候,你细胞让他多长长,密这点应该没事,只要不是太密,你的药用培养基稀释,今天喝的有点多,说话有点啰嗦,希望对你有帮助,祝你成功!!!
3楼2012-12-24 15:25:00
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zhouhh2809

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
现在都用MTS试剂盒啦,方便而且价格也不贵。。。
7楼2012-12-25 08:18:38
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普通回帖

western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
悬浮细胞铺板过24h加药或者铺完板就加药都可以,药物体积看你用什么溶的,如果培养基溶的,那影响不大,多加少加都一样,如果用PBS或者DMSO溶,那就按溶解度来,能少加就少加。关键是平行实验,加的体积要一样。做MTT,你是离心还是用改良的MTT法,直接测?
ForDream!
2楼2012-12-24 15:14:54
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grace415

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by western虫 at 2012-12-24 15:14:54
悬浮细胞铺板过24h加药或者铺完板就加药都可以,药物体积看你用什么溶的,如果培养基溶的,那影响不大,多加少加都一样,如果用PBS或者DMSO溶,那就按溶解度来,能少加就少加。关键是平行实验,加的体积要一样。做M ...

嗯,我是用的MTS,就免去了离心那一步了,觉得离心比较麻烦,取上清液也怕取的参差不齐。
4楼2012-12-24 16:15:51
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grace415

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yeyu541200 at 2012-12-24 15:25:00
我没有养过悬浮细胞,只养过贴壁细胞,所以只能给你提提建议,给药时间我觉得悬浮的细胞应该是细胞长到60%以上,也就是你平常穿细胞的时间往前推2到3小时就行,.至于药物的浓度,你不是要测药物的毒性试验么,我感觉 ...

谢谢!
5楼2012-12-24 16:22:38
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grace415

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhouhh2809 at 2012-12-25 08:18:38
现在都用MTS试剂盒啦,方便而且价格也不贵。。。

是啊~我是买的MTS的溶液
8楼2012-12-26 09:47:18
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grace415

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by western虫 at 2012-12-24 16:46:27
那你就先按90ul细胞悬液(1000-3000细胞)铺板,24h+你药物作用时间,20ulMTS,在1-4小时摸索一下,看看490nm下的OD能不能在1附近。然后根据摸的条件做实验,铺板,24h后加药,药物作用完20%体积的MTS,然后测OD就 ...

好的,谢谢!
9楼2012-12-26 09:47:32
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晨基范宁

金虫 (初入文坛)

最近刚刚好想要接触细胞,看到楼主的发帖,本着学习的态度进来,学到了不少东西,谢谢上面几位的回帖~~~
10楼2012-12-26 10:34:44
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