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组织块贴壁法培养细胞如何做？
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各位各位这里瞧下下哈，我是个菜鸟级别的，问一下菜鸟问题哦～那个组织块贴壁培养细胞具体是个啥子过程嘞？细胞不纯的话，怎么消化怎么传代啊？谢谢各位咯*^_^* [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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【答案】应助回帖
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zhaohq1209: 金币+3, BioEPI+1, telomerase: 金币+4, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-05-09 09:13 2012-05-09 10:02:03
zhaohq1209: 金币+3, BioEPI+1, telomerase: 金币+4, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-05-09 09:13 2012-05-09 10:02:03
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很久以前做的，做法如下： 实验所要用的工具都应灭菌消毒。首先，在实验前24h于60×15mm的培养皿内铺上血清，将铺有血清的培养皿放入细胞培养箱内。。。。。。组织取出，用PBS将其冲洗干净。将组织切割成1mm3左右的小块。在剪切过程中，可以适当的向组织上滴1～2滴培养液，以保持湿润。然后，将剪切好的组织块用眼科镊均匀铺于事先准备好的培养皿内,加入少量含20％胎牛血清的DMEM培养液，以组织块不在培养液内漂浮为宜，然后把培养皿放置在37℃培养箱内。放置2～4h后待组织小块贴附于培养皿，加入含20％胎牛血清的DMEM培养液，在37℃含5%的CO2的条件下培养，待1～2天后细胞由组织中游出，摘掉组织块并用PBS清洗培养皿去除死细胞和组织残留物，加入培养液继续培养。待培养皿中的细胞长满后用胰蛋白酶将其消化下来，转入50ml的塑料培养瓶中培养，此时的细胞我们称其为原代。。。。细胞。 至于纯化，我做的是肺的，细胞相对含量不复杂，我要的细胞含量很高，所以穿几代，就纯化得差不多了。 要是肝的，那就不好做了。。。。。 |
2楼2012-05-09 09:13:08
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telomerase: 金币+8, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-05-12 00:14:55
雨玫天晴: 回帖置顶 2012-05-12 06:59:16
telomerase: 金币+8, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-05-12 00:14:55
雨玫天晴: 回帖置顶 2012-05-12 06:59:16
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这里是我所知道的细胞培养纯化的方法，希望能够帮助到你的，上皮细胞的话，是会不纯的，我们实验室的上皮细胞一般能够传到5代的样子。这里面有你需要的反复贴壁法的。你看看吧。 1、自然纯化 即利用某一种类细胞的增殖优势，而排挤其他细胞生长，靠自然的增值潜力最后留下生长优势细胞，去除其他细胞。有些恶性肿瘤细胞可以通过此方法，自然纯化建立细胞系。 2、人工纯化 （1）酶消化法 在消化培养细胞时，常是成纤维细胞先脱壁，而上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁，特别是在原代培养和培养早期这种差别尤为明显，因而可以利用这种差异采用多次差别消化方法将上皮细胞和成纤维细胞分开。 （2）机械划除法 原代培养成功后，上皮细胞和成纤维细胞所数都同时出现，混杂生长。这种混杂生长常常分区成片，每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。因此可以采用机械的方法去除不需要的细胞。 （3）反复贴壁法 成纤维细胞与上皮细胞相比，其贴壁过程快，大部分细胞常能在短时间内大约10－30min完成附着过程，而上皮细胞大部分在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，这样可以利用此差别来纯化细胞。 （4）克隆法 采用细胞克隆法将细胞分成单个细胞，使之分别生长成克隆，选择出所需要的克隆。 （5）培养及限定方法 某些细胞在生长过程中必须存在或必须去除某种物质，否则无法生长，可以利用这种技术来纯化细胞。 还有一种就是流式分选法，但是貌似很少用到的。 |
7楼2012-05-11 09:50:09
3楼2012-05-10 00:18:59
4楼2012-05-10 13:22:43
5楼2012-05-10 19:23:27
6楼2012-05-10 19:38:02
8楼2012-05-12 06:57:35