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1989zb

金虫 (小有名气)

[求助] 肝细胞培养问题! 已有2人参与

有没有人知道,做肝细胞,怎么除去里面的脂肪呢??刚分离出来的肝细胞,还很多,第二天就很少了 还不怎么贴壁,这是什么原因呢
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ifyousee

新虫 (小有名气)

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★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1989zb: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-02-25 16:52:19
我长期从事鱼类各种组织细胞的原代培养。大黄鱼、欧洲鳗鲡、日本鳗鲡、眼斑拟石首鱼的肝脏都是有培养过的。最终也能成功建细胞系。肝细胞原代培养的确看起来非常脏
首先很重要的是你们用的是什么动物的肝脏。其次培养基、培养温度、CO2、培养条件等等的。
关于肝脏培养的方法有很多,我最喜欢用的有两种:组织块干贴和胰酶消化组织块悬液两种办法,各有优缺点吧。
培养肝细胞里面飘着的“脂肪”状的杂质的确很多,但是根据我原代培养的经验其实这些杂质是没有影响的。
2楼2014-02-25 12:26:09
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1989zb

金虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-25 12:26:09
我长期从事鱼类各种组织细胞的原代培养。大黄鱼、欧洲鳗鲡、日本鳗鲡、眼斑拟石首鱼的肝脏都是有培养过的。最终也能成功建细胞系。肝细胞原代培养的确看起来非常脏
首先很重要的是你们用的是什么动物的肝脏。其次培 ...

嗯 我培养的是鸭胚肝细胞,就是刚分离出来的肝细胞在细胞瓶里面 看着很浑浊,,还想着怎么去除那类似脂肪的东西  刚分离出来细胞瓶里面还是很多,过了几个小时在看,就很少了  
请教哈你用胰酶消化胰酶的浓度以及消化时间是多少呢??
可以把你的方法给我一份吗?
3楼2014-02-25 16:52:08
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ifyousee

新虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-25 16:52:08
嗯 我培养的是鸭胚肝细胞,就是刚分离出来的肝细胞在细胞瓶里面 看着很浑浊,,还想着怎么去除那类似脂肪的东西  刚分离出来细胞瓶里面还是很多,过了几个小时在看,就很少了  
请教哈你用胰酶消化胰酶的浓度以及 ...

胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中,过个5分钟晃动一下,成乳糜状就可以了,觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净。另外脂肪我觉得是真没有影响。
4楼2014-02-27 10:02:31
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1989zb

金虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-27 10:02:31
胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中,过个5分钟晃动一下,成乳糜状就可以了,觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净 ...

做了好几次了,都不怎么贴壁,你做的效果好吗?
5楼2014-02-27 12:49:34
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1989zb

金虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-27 10:02:31
胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中,过个5分钟晃动一下,成乳糜状就可以了,觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净 ...

你一般是刚分离出来,什么时候首次换液呢??首次换液后,每隔多久在换呢?
6楼2014-02-27 12:51:23
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1989zb

金虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-27 10:02:31
胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中,过个5分钟晃动一下,成乳糜状就可以了,觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净 ...

我3000rpm离心5min,分离出来细胞挺多的,就是不贴壁!但是用1500rpm离心,得到的细胞就很少了。

还有个问题,你用的细胞瓶是透气的还是不透气的呢?
7楼2014-02-27 17:43:24
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ifyousee

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7楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-27 17:43:24
我3000rpm离心5min,分离出来细胞挺多的,就是不贴壁!但是用1500rpm离心,得到的细胞就很少了。

还有个问题,你用的细胞瓶是透气的还是不透气的呢?...

不透气的。但是透气的也可以。透气的就必须在CO2恒湿培养箱,不透气的可以在干式培养箱培养。
8楼2014-02-28 12:56:33
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ifyousee

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6楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-27 12:51:23
你一般是刚分离出来,什么时候首次换液呢??首次换液后,每隔多久在换呢?...

看下20-30%覆盖的时候就可以换液了,基本上1-2天
9楼2014-02-28 12:58:04
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ifyousee

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5楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-27 12:49:34
做了好几次了,都不怎么贴壁,你做的效果好吗?...

挺好的呀,不好怎么建细胞系啊
10楼2014-02-28 12:58:38
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