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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 肝细胞培养问题！
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1989zb

金虫 (小有名气)

[求助] 肝细胞培养问题！ 已有2人参与

有没有人知道，做肝细胞，怎么除去里面的脂肪呢？？刚分离出来的肝细胞，还很多，第二天就很少了 还不怎么贴壁，这是什么原因呢
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1楼 2014-02-25 09:38:54
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ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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1989zb: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-02-25 16:52:19
我长期从事鱼类各种组织细胞的原代培养。大黄鱼、欧洲鳗鲡、日本鳗鲡、眼斑拟石首鱼的肝脏都是有培养过的。最终也能成功建细胞系。肝细胞原代培养的确看起来非常脏
首先很重要的是你们用的是什么动物的肝脏。其次培养基、培养温度、CO2、培养条件等等的。
关于肝脏培养的方法有很多，我最喜欢用的有两种：组织块干贴和胰酶消化组织块悬液两种办法，各有优缺点吧。
培养肝细胞里面飘着的“脂肪”状的杂质的确很多，但是根据我原代培养的经验其实这些杂质是没有影响的。
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2楼2014-02-25 12:26:09
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1989zb

金虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-25 12:26:09
我长期从事鱼类各种组织细胞的原代培养。大黄鱼、欧洲鳗鲡、日本鳗鲡、眼斑拟石首鱼的肝脏都是有培养过的。最终也能成功建细胞系。肝细胞原代培养的确看起来非常脏
首先很重要的是你们用的是什么动物的肝脏。其次培 ...

嗯 我培养的是鸭胚肝细胞，就是刚分离出来的肝细胞在细胞瓶里面 看着很浑浊，，还想着怎么去除那类似脂肪的东西  刚分离出来细胞瓶里面还是很多，过了几个小时在看，就很少了  
请教哈你用胰酶消化胰酶的浓度以及消化时间是多少呢？？
可以把你的方法给我一份吗？
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3楼2014-02-25 16:52:08
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ifyousee

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-25 16:52:08
嗯 我培养的是鸭胚肝细胞，就是刚分离出来的肝细胞在细胞瓶里面 看着很浑浊，，还想着怎么去除那类似脂肪的东西  刚分离出来细胞瓶里面还是很多，过了几个小时在看，就很少了  
请教哈你用胰酶消化胰酶的浓度以及 ...

胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中，过个5分钟晃动一下，成乳糜状就可以了，觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净。另外脂肪我觉得是真没有影响。
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4楼2014-02-27 10:02:31
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1989zb

金虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-27 10:02:31
胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中，过个5分钟晃动一下，成乳糜状就可以了，觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净 ...

做了好几次了，都不怎么贴壁，你做的效果好吗？
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5楼2014-02-27 12:49:34
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1989zb

金虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-27 10:02:31
胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中，过个5分钟晃动一下，成乳糜状就可以了，觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净 ...

你一般是刚分离出来，什么时候首次换液呢？？首次换液后，每隔多久在换呢？
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6楼2014-02-27 12:51:23
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1989zb

金虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-27 10:02:31
胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中，过个5分钟晃动一下，成乳糜状就可以了，觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净 ...

我3000rpm离心5min，分离出来细胞挺多的，就是不贴壁！但是用1500rpm离心，得到的细胞就很少了。

还有个问题，你用的细胞瓶是透气的还是不透气的呢？
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7楼2014-02-27 17:43:24
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ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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7楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-27 17:43:24
我3000rpm离心5min，分离出来细胞挺多的，就是不贴壁！但是用1500rpm离心，得到的细胞就很少了。

还有个问题，你用的细胞瓶是透气的还是不透气的呢？...

不透气的。但是透气的也可以。透气的就必须在CO2恒湿培养箱，不透气的可以在干式培养箱培养。
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8楼2014-02-28 12:56:33
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ifyousee

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-27 12:51:23
你一般是刚分离出来，什么时候首次换液呢？？首次换液后，每隔多久在换呢？...

看下20-30%覆盖的时候就可以换液了，基本上1-2天
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9楼2014-02-28 12:58:04
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ifyousee

新虫 (小有名气)

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5楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-27 12:49:34
做了好几次了，都不怎么贴壁，你做的效果好吗？...

挺好的呀，不好怎么建细胞系啊
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10楼2014-02-28 12:58:38
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