24小时热门版块排行榜    

查看: 2255  |  回复: 11

gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 关于RPMI1640培养基

目前在培养正常的肝细胞和肝癌细胞,使用的培养基分别是用RPMI1640+20%FBS和RPMI1640+10%FBS。昨晚做正常细胞的传代实验,传完后才发现培养基下面有一些白色碎片状东西,然后将传的三盘细胞丢了两盘,留下一盘观察是否污染。今早来看,培养基没有浑浊,细胞贴壁效果很好,只是上面漂浮着一些死细胞,这可能是由于复苏后没传几代的缘故。自己不放心,又让师兄来看,师兄说细胞没有污染。但是放置冰箱中的培养基出现白色东西,却不知道如何解释。肿瘤细胞的培养基一直正常,而正常细胞的培养基已经是第二次出现这种东西了,我操作过程是一样的,为什么它老是出现白色东西?是污染吗?还是由于正常细胞培养基血清浓度高而出现的蛋白质结晶?希望有经验的人解答一下,万分感谢!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

细胞实验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

gloryping(金币+2): 2011-09-07 17:48:53
应该不是蛋白析出的问题,就算是纯血清也没有蛋白析出的,何况是稀释了的。除非你用的血清质量有问题。 细胞污染的话污染物也要同步生长且严重影响细胞生长,如果不是这种现象的话只能认为是杂质或者代谢产物,不影响的,不用理会。另外不建议你自己去离心或者二次过滤血清,商品血清都是无菌处理过的,你这样一折腾的话反而是画蛇添足了。死细胞在任何培养体系里都是不能完全避免的,最初复苏的时候是很严重的,后续培养时如果长时间不换液的话也会出现大量死亡,只要死亡量不是很大,活着的细胞状态仍然很好就可以无视死细胞。
摒气动方息,宁神心自明。
5楼2011-09-07 15:32:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-07 13:08:55
真菌污染的情况下,真菌可以和细胞共生的,各长各的
当然也可能是其他情况,不过20%的FBS,以前见别人配过,我自己都是用10%的,貌似没有会析出蛋白的印象...
生活是美好的
2楼2011-09-06 16:52:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★
adslye(金币+2): 你的这个反馈很哈!鼓励鼓励! 2011-09-07 13:09:26
引用回帖:
2楼: Originally posted by nuoyaeva at 2011-09-06 16:52:23:
真菌污染的情况下,真菌可以和细胞共生的,各长各的
当然也可能是其他情况,不过20%的FBS,以前见别人配过,我自己都是用10%的,貌似没有会析出蛋白的印象...

细胞木事,长的挺好的,还用培养基做了试培实验,没有发现污染物。今天不放心,重新配置了培养基,发现血清的管底有一团东西,后来查到相关资料:血清中的絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理。所以应该没有问题了。O(∩_∩)O谢谢
3楼2011-09-06 16:59:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gloryping at 2011-09-06 17:59:58:
细胞木事,长的挺好的,还用培养基做了试培实验,没有发现污染物。今天不放心,重新配置了培养基,发现血清的管底有一团东西,后来查到相关资料:血清中的絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白 ...

原来这这样,我也学习下~~
生活是美好的
4楼2011-09-07 12:38:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

gloryping(金币+2): 2011-09-07 17:51:47
可能你的血清是热灭活的。若必须做血清的热灭活,请遵守56度,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不过容易堵塞滤器。这个一般不影响培养,没啥问题的。
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家,他们每天都在思考人类最根本的三个问题:你是谁?你从哪儿来?要去哪儿?
6楼2011-09-07 15:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pxmyz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

gloryping(金币+2): 2011-09-07 17:53:22
对于不放心的培养基或溶液可以再次过滤除菌。
Ican,Ido.
7楼2011-09-07 16:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by terry130 at 2011-09-07 15:32:43:
应该不是蛋白析出的问题,就算是纯血清也没有蛋白析出的,何况是稀释了的。除非你用的血清质量有问题。 细胞污染的话污染物也要同步生长且严重影响细胞生长,如果不是这种现象的话只能认为是杂质或者代谢产物,不 ...

恩恩 O(∩_∩)O谢谢解答,学到了很多
8楼2011-09-07 17:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by rb at 2011-09-07 15:44:26:
可能你的血清是热灭活的。若必须做血清的热灭活,请遵守56度,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不 ...

(⊙v⊙)嗯  血清就这样用了,没影响细胞生长。主要是我刚开始培养细胞,其实还没遇到污染,有时老是自己吓自己,O(∩_∩)O~
9楼2011-09-07 17:53:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by pxmyz at 2011-09-07 16:50:45:
对于不放心的培养基或溶液可以再次过滤除菌。

培养基试培后木有问题,应该不会影响细胞生长了,O(∩_∩)O~
10楼2011-09-07 17:53:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gloryping 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 一志愿浙江大学0856材料与化工求调剂 +4 yansheng@211 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:10 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 328,0703考生求调剂,一志愿为东北师范大学 +4 观素律 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:24 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。,。,。,。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
信息提示
请填处理意见