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afred

木虫 (正式写手)


[交流] 癌细胞培养问题

细胞解冻后,第一天状态超好,第二天也很好,第三天基本涨到90%左右开始隔代。

隔代后8小时内长势也很不错,改贴的贴,但是一晚上后离奇的全部死亡。

请大侠出来救命啊。培养基颜色从鲜红变玫瑰红,PH 从7.2 上升至7.9. 接近死的边缘了,饿死不可能,怀疑是CO2的问题,但是具体不知道为什么偏偏隔代后第一天就全部死去呢,胰蛋白酶使用没问题。
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blackdogzmz

木虫 (职业作家)


不懂,帮顶一下,请别人来答吧.....
2楼2012-09-27 14:22:50
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★ ★
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afred: 金币+1 2012-09-28 08:13:12
可能是营养物质不够,或者突变成为致死类型
4楼2012-09-27 21:44:52
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wzqno

金虫 (小有名气)


★ ★ ★
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afred: 金币+2 2012-10-02 07:35:47
二氧化碳高会让PH值下降,颜色变成橙黄色,所以你这应该不是二氧化碳高引起的,解冻之后DMSO去除的怎么样?DMSO毒性也很高的,复苏后头两天的状态和细胞刚冻存的状态有关,既然解冻后看到细胞很好说明和细胞冻存没关系的,下次复苏细胞用培养基多洗几遍。或者让别人代你复苏一下,养好了再交给你试试
6楼2012-09-28 13:23:34
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icid

银虫 (初入文坛)


★ ★
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afred: 金币+1 2012-10-02 07:35:52
pH上升,是不是CO2浓度降低了?其他细胞没事吗?
7楼2012-09-30 15:59:55
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销魂哥

铜虫 (小有名气)


★ ★
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afred: 金币+1 2012-10-02 07:35:55
不知道温度怎么样,胰蛋白酶是否失活了,还是PH不对,有时条件不对要一段时间才会发现的,建议多做几组对照试试
8楼2012-09-30 19:23:39
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)


★ ★
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afred: 金币+1 2012-10-05 15:33:02
我觉得是CO2浓度低造成的,因为你细胞复苏已经几天开始准备传代培养,所以是co2培养箱出问题的可能性较大,导致细胞死亡。
9楼2012-10-05 14:23:47
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l-c-l

金虫 (正式写手)


★ ★
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wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-06 06:24:32
若是二氧化碳的问题,培养基颜色会发生很大变化,看你说的情况更像是温度的问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2012-10-06 00:59:20
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destiny_txc

新虫 (初入文坛)



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有没有可能是被污染了
11楼2012-10-09 09:55:30
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jijianjndx

银虫 (小有名气)



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已经染菌鉴定完毕!染菌后培养液会变色的特别快,且pH有变化
12楼2012-11-13 16:47:26
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bwshanxi

至尊木虫 (文坛精英)



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做实验怎么也不重复准备一下呢,缺这少那的怎么能做好
13楼2012-11-17 11:33:03
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huangguoqing

木虫 (正式写手)


★ ★
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afred: 金币+1 2012-11-30 20:29:08
个人建议,仅供参考!
1、CO2供应量不足;
2、培养基里面忘记添加血清;
3、培养瓶瓶盖旋的过紧。
14楼2012-11-30 15:41:57
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louisa俊

银虫 (小有名气)



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可能是培养基问题,也可能是细胞数目太多了,培养瓶放在培养箱里的时候,瓶口要稍微松开点。。。
15楼2013-05-21 15:42:26
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漫步北极熊

金虫 (正式写手)


毒死的 解冻时用新鲜培养基离心然后再重悬培养
16楼2013-09-12 17:45:51
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hl16010921

木虫 (正式写手)



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pH=7.9。二氧化碳浓度肯定不对,检查钢瓶的气压表,看瓶内压力和减压后的压力是否正常,培养箱是否漏气吧。有时就是前一次换液培养箱门没关严(老箱子更是容易在密封垫变形或脏了导致漏气)。另外培养基配置时是否加盐酸调pH了。如果培养基的碳酸氢钠含量不足会使缓冲能力下降,如果代谢产生胺类的话,也会变碱
17楼2013-09-13 14:19:10
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cxy8023

银虫 (初入文坛)



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很有可能是污染了
18楼2015-01-31 16:11:18
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2012-09-27 21:12   回复  
2012-09-27 21:59   回复  
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