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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 癌细胞培养问题
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afred

木虫 (正式写手)

[交流] 癌细胞培养问题

细胞解冻后，第一天状态超好，第二天也很好，第三天基本涨到90%左右开始隔代。

隔代后8小时内长势也很不错，改贴的贴，但是一晚上后离奇的全部死亡。

请大侠出来救命啊。培养基颜色从鲜红变玫瑰红，PH 从7.2 上升至7.9. 接近死的边缘了，饿死不可能，怀疑是CO2的问题，但是具体不知道为什么偏偏隔代后第一天就全部死去呢，胰蛋白酶使用没问题。
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1楼 2012-09-27 13:54:33
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blackdogzmz

木虫 (职业作家)
不懂,帮顶一下,请别人来答吧.....
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2楼2012-09-27 14:22:50
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缩++影

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★
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afred: 金币+1 2012-09-28 08:13:12
可能是营养物质不够，或者突变成为致死类型
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4楼2012-09-27 21:44:52
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wzqno

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
afred: 金币+2 2012-10-02 07:35:47
二氧化碳高会让PH值下降，颜色变成橙黄色，所以你这应该不是二氧化碳高引起的，解冻之后DMSO去除的怎么样？DMSO毒性也很高的，复苏后头两天的状态和细胞刚冻存的状态有关，既然解冻后看到细胞很好说明和细胞冻存没关系的，下次复苏细胞用培养基多洗几遍。或者让别人代你复苏一下，养好了再交给你试试
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6楼2012-09-28 13:23:34
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icid

银虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
afred: 金币+1 2012-10-02 07:35:52
pH上升，是不是CO2浓度降低了？其他细胞没事吗？
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7楼2012-09-30 15:59:55
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销魂哥

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
afred: 金币+1 2012-10-02 07:35:55
不知道温度怎么样，胰蛋白酶是否失活了，还是PH不对，有时条件不对要一段时间才会发现的，建议多做几组对照试试
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8楼2012-09-30 19:23:39
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
afred: 金币+1 2012-10-05 15:33:02
我觉得是CO2浓度低造成的，因为你细胞复苏已经几天开始准备传代培养，所以是co2培养箱出问题的可能性较大，导致细胞死亡。
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9楼2012-10-05 14:23:47
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l-c-l

金虫 (正式写手)
★ ★
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wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-06 06:24:32
若是二氧化碳的问题，培养基颜色会发生很大变化，看你说的情况更像是温度的问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2012-10-06 00:59:20
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destiny_txc

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有没有可能是被污染了
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11楼2012-10-09 09:55:30
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jijianjndx

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
已经染菌鉴定完毕！染菌后培养液会变色的特别快，且pH有变化
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12楼2012-11-13 16:47:26
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bwshanxi

至尊木虫 (文坛精英)
★
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做实验怎么也不重复准备一下呢，缺这少那的怎么能做好
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13楼2012-11-17 11:33:03
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huangguoqing

木虫 (正式写手)
★ ★
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afred: 金币+1 2012-11-30 20:29:08
个人建议，仅供参考！
1、CO2供应量不足；
2、培养基里面忘记添加血清；
3、培养瓶瓶盖旋的过紧。
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14楼2012-11-30 15:41:57
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louisa俊

银虫 (小有名气)
★
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可能是培养基问题，也可能是细胞数目太多了，培养瓶放在培养箱里的时候，瓶口要稍微松开点。。。
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15楼2013-05-21 15:42:26
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漫步北极熊

金虫 (正式写手)
毒死的 解冻时用新鲜培养基离心然后再重悬培养
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16楼2013-09-12 17:45:51
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hl16010921

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
pH=7.9。二氧化碳浓度肯定不对，检查钢瓶的气压表，看瓶内压力和减压后的压力是否正常，培养箱是否漏气吧。有时就是前一次换液培养箱门没关严（老箱子更是容易在密封垫变形或脏了导致漏气）。另外培养基配置时是否加盐酸调pH了。如果培养基的碳酸氢钠含量不足会使缓冲能力下降，如果代谢产生胺类的话，也会变碱
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17楼2013-09-13 14:19:10
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cxy8023

银虫 (初入文坛)
★
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很有可能是污染了
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18楼2015-01-31 16:11:18
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简单回复
yingying15883楼
2012-09-27 21:12   回复  
不如看海5楼
2012-09-27 21:59   回复  
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