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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 新手关于贴壁癌细胞传代的一些小问题，请教各位高手
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静静等待的人

铁虫 (小有名气)

[求助] 新手关于贴壁癌细胞传代的一些小问题，请教各位高手已有6人参与

最近跟着师姐做细胞实验，操作太差被训了，想请教下面几个问题



1 消化的时候，师姐告诉我如果消化过了就加多于胰酶量的培养基终止反应然后吹打，离心。如果是刚好的话就倒掉胰酶，再加培养基吹打离心。我看了很多网上的说法，有说刚开始细胞变圆就倒掉胰酶的，但是今天我做的时候在显微镜下看到变圆了，但是是成片的细胞，师姐说还没有消化好，再放了30s 结果就过头了

2 离心过后的上清液是直接倒到废液缸还是用吸管吸出啊

3分瓶的时候需要计数吗 师姐说影响不大，一般浓度是多大啊。我用的是100ml的培养瓶。

4 因为今天操作很多被说的很惨 师姐带了我两个星期 基本隔天就在细胞房，我在旁边看着她操作。前几天自己换了培养瓶里面的培养基，今天传代。两次操作从头被说到尾，我想问问大家 是不是我真的很笨啊，大家开始的时候都这样吗
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1楼2014-07-21 15:00:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
静静等待的人: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:18:47
相信我，不是你笨，是师姐不是好老师。
培养细胞是不能再简单活了，没有你师姐说的那么严重。只要不污染其他都是小问题，甚至根本不是问题。一般肿瘤细胞都很好培养，消化过程也很简单，不需要特别在意过不过的问题，即便“过了”，对细胞的后续过程一般也基本没有影响。当然，有些细胞消化后容易黏在一起，不容易打散，这时候培养基不要加太多，在小体积条件下更容易些。
同学别急，也别在意别人说些什么，开始吗，即便出点什么问题也是正常的，不出问题反倒有些不正常了。否则怎么进步呢？

希望没有得罪你的师姐。放松心情，好好生活
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4楼2014-07-21 21:00:57
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普通回帖

静静等待的人

铁虫 (小有名气)
自己顶一下
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2楼2014-07-21 15:31:27
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静静等待的人

铁虫 (小有名气)
没有人理我吗
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3楼2014-07-21 19:53:14
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
静静等待的人: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:18:36
你师姐没有很好的教你也是有责任的。
癌细胞的培养并不复杂，消化条件也很宽松，就算过了也没问题的。反正离心前加培养基是必须的，所以也不用担心过不过的问题。培养基中的血清会终止酶反应的。
如果细胞成片的话也可以用移液枪抽取打散。
离心之后细胞都会沉积，上清液直接倒在无菌操作橱里的废液缸就可以了。
至于培养基，100ml培养瓶的话，应该20ml的培养基就可以了吧，这个不是特别确定，我大多是用10cm培养皿或T75。

总之不要心急，慢慢来就好，做好无菌操作，不要染菌就不会有很大问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
5楼2014-07-22 03:58:09
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王清洪

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
熟练需要过程，多多练习就好了，
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6楼2014-07-22 08:59:47
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-22 03:58:09
你师姐没有很好的教你也是有责任的。
癌细胞的培养并不复杂，消化条件也很宽松，就算过了也没问题的。反正离心前加培养基是必须的，所以也不用担心过不过的问题。培养基中的血清会终止酶反应的。
如果细胞成片的话 ...

嗯，总有一些师兄师姐的，把实验失败归罪于学弟学妹，其实实验不确定性很多啊
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我会绕一个圈，走回到实验室
7楼2014-07-22 10:07:54
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95174999

新虫 (初入文坛)
消化过了，加培养基终止消化这种做法是对的。什么是消化好了，就是80%的细胞变圆，彼此分开就可以了，也可以在显微镜下看时左右或上下动一动，又出现悬浮的，几乎是消化好了，可以吹打。
离心后的上清液最好是吸出，这样安全也不易污染。
分瓶的时候不用计数，看你的细胞生长情况，一般癌细胞比较好培养，并且生长较快，可以少接种一点，少于1ml足够了。计数只有在细胞铺板时才需要的。
细胞培养需要细心和耐心，当熟练了就好了，其实很简单的。
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8楼2014-07-22 10:49:38
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
静静等待的人: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:18:01
静静等待的人: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:19:25
其实你只是开始不熟悉细胞实验的操作罢了~ 每个人刚刚开始接触细胞实验都是这样的，有人在一旁看着会比较紧张。贴壁细胞呢，不管是不是癌细胞尽量不要消化的太过，那样对细胞会有损伤的。显微镜下看到细胞变圆，轻轻晃动胰酶看到有细胞（白色的）滑落为宜，就可以吸出胰酶了~ 再用培养基就很容易吹下来的。每种细胞都有自己的特点，这个消化时间还是需要自己多做几次掌握好度就可以做得很好了。
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9楼2014-07-22 10:52:12
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静静等待的人

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-21 21:00:57
相信我，不是你笨，是师姐不是好老师。
培养细胞是不能再简单活了，没有你师姐说的那么严重。只要不污染其他都是小问题，甚至根本不是问题。一般肿瘤细胞都很好培养，消化过程也很简单，不需要特别在意过不过的问题 ...

谢谢安慰   因为以前上学从小学开始也没被说的这么惨过  一时接受不了 今天又去换液了 还好还好 而且师姐也是为我好 她说老板要求很严 吹毛求疵  我想她性格也是那样的   
你也不存在得罪不得罪的哈。谢谢
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10楼2014-07-22 11:11:38
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