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HIT-T15细胞培养 已有2人参与
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有养HIT-T15细胞的童鞋吗，额，养了半年了，细胞总是有黑点，离心无法解决。怀疑是支原体污染，加了去支原体药处理了近一个月了，还是不行。黑点很多，看着很脏的样子，细胞长得也很慢。有童鞋养这个细胞吗，你们的怎么样呢，额，急求交流啊 ~~~ |
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2楼2013-07-01 16:47:56
renshaofang
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- 专业: 发育生物学与生殖生物学
3楼2013-07-02 11:00:45
renshaofang
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137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-02 16:08:39
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HIT-T15（仓鼠beta胰岛细胞）细菌破壁方法细菌破壁是成功提取DNA的关键步骤之一。革兰氏阳性菌的肽聚糖层构成坚韧的三维立体结构,而阴性菌肽聚糖层构成疏松的二维结构,因此不同种类细菌的破壁方法不同。目前破壁方法有十二烷基磺酸钠（SDS）裂解法、溶菌酶法、反复冻融法、研磨法、超声波法等。不同细菌对溶解剂有不同的抗性,溶解细菌前需先取少量菌悬液,加一定浓度的溶解剂,看是否能溶解菌体。 HIT-T15（仓鼠beta胰岛细胞）若SDS和溶菌酶均能溶解菌体 ,最好使用既廉价又能抑制DNase的SDS;若需用溶菌酶应加入SDS促进溶菌;如果60℃溶菌过程缓慢,可将温度提高到70～75℃;有些菌也可用脱氧胆酸盐破裂细胞膜溶解菌体。对溶解剂有抗性的菌类,可在含青霉素或甘氨酸的培养基中培养,使其不形成细胞壁。如SDS和酶破壁效果不理想,可同时用反复冻融、超声波或氧化铝和玻璃粉研磨辅助破壁。 细胞污染解决方法: 污染表现是很碎小的黑色聚堆的东西（能想象一堆碎松针堆个圆吗），高倍镜下似乎能动（或者只是物理运动），动作幅度不大，发展较慢，出现后对细胞生长和状态看不出影响，但一旦吹散则发展迅速，污染明显，细胞死亡，培养基发黄. 这是结团的细菌。开始长得很慢，一旦扩散就很快使培养基变浑浊。出现染菌只能丢掉，重新开始培养。不必试图把菌杀死保留细胞，因为这一般无法办到。 高倍镜下看“团”的周围，其实可以看打到很多细菌在不停地“打弯”运动。如果发现得早， 可以尽可能地将其稀释除掉控制的办法就是多开紫外，实验前东西现用现灭，从瓶子里取培养基时多用移液管少用枪头，勤快打扫无菌室。 |
4楼2013-07-02 11:02:04
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