| 查看: 1816 | 回复: 6 | |||
[交流]
HIT-T15细胞培养 已有2人参与
|
有养HIT-T15细胞的童鞋吗，额，养了半年了，细胞总是有黑点，离心无法解决。怀疑是支原体污染，加了去支原体药处理了近一个月了，还是不行。黑点很多，看着很脏的样子，细胞长得也很慢。有童鞋养这个细胞吗，你们的怎么样呢，额，急求交流啊 ~~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
基金啊基金
已经有3人回复
-
科研孤儿太难了
已经有15人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有10人回复
-
言之凿凿，明天官网会通知放榜？
已经有17人回复
-
时间戳又变了
已经有17人回复
-
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有11人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有23人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有22人回复
-
放榜前的不淡定
已经有12人回复
-
重要消息，中午系统在维护
已经有12人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- MRC-5细胞培养问题
已经有13人回复
- Sf-9昆虫细胞培养
已经有16人回复
- 癌细胞培养问题
已经有17人回复
- 细胞培养后形态变得不太规则的因素
已经有5人回复
- 关于MCF-7细胞培养的问题
已经有12人回复
- 细胞培养相关问题 急！！！！！
已经有13人回复
- 细胞培养求助
已经有5人回复
- 【求助/交流】293T细胞培养求助
已经有10人回复
- 求助血管内皮细胞培养问题（急）
已经有6人回复
- 细胞培养视频下载.
已经有12人回复
2楼2013-07-01 16:47:56
renshaofang
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 115.6
- 红花: 1
- 帖子: 103
- 在线: 65.1小时
- 虫号: 1383421
- 注册: 2011-08-29
- 专业: 发育生物学与生殖生物学
3楼2013-07-02 11:00:45
renshaofang
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 115.6
- 红花: 1
- 帖子: 103
- 在线: 65.1小时
- 虫号: 1383421
- 注册: 2011-08-29
- 专业: 发育生物学与生殖生物学
★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-02 16:08:39
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-02 16:08:39
|
HIT-T15（仓鼠beta胰岛细胞）细菌破壁方法细菌破壁是成功提取DNA的关键步骤之一。革兰氏阳性菌的肽聚糖层构成坚韧的三维立体结构,而阴性菌肽聚糖层构成疏松的二维结构,因此不同种类细菌的破壁方法不同。目前破壁方法有十二烷基磺酸钠（SDS）裂解法、溶菌酶法、反复冻融法、研磨法、超声波法等。不同细菌对溶解剂有不同的抗性,溶解细菌前需先取少量菌悬液,加一定浓度的溶解剂,看是否能溶解菌体。 HIT-T15（仓鼠beta胰岛细胞）若SDS和溶菌酶均能溶解菌体 ,最好使用既廉价又能抑制DNase的SDS;若需用溶菌酶应加入SDS促进溶菌;如果60℃溶菌过程缓慢,可将温度提高到70～75℃;有些菌也可用脱氧胆酸盐破裂细胞膜溶解菌体。对溶解剂有抗性的菌类,可在含青霉素或甘氨酸的培养基中培养,使其不形成细胞壁。如SDS和酶破壁效果不理想,可同时用反复冻融、超声波或氧化铝和玻璃粉研磨辅助破壁。 细胞污染解决方法: 污染表现是很碎小的黑色聚堆的东西（能想象一堆碎松针堆个圆吗），高倍镜下似乎能动（或者只是物理运动），动作幅度不大，发展较慢，出现后对细胞生长和状态看不出影响，但一旦吹散则发展迅速，污染明显，细胞死亡，培养基发黄. 这是结团的细菌。开始长得很慢，一旦扩散就很快使培养基变浑浊。出现染菌只能丢掉，重新开始培养。不必试图把菌杀死保留细胞，因为这一般无法办到。 高倍镜下看“团”的周围，其实可以看打到很多细菌在不停地“打弯”运动。如果发现得早， 可以尽可能地将其稀释除掉控制的办法就是多开紫外，实验前东西现用现灭，从瓶子里取培养基时多用移液管少用枪头，勤快打扫无菌室。 |
4楼2013-07-02 11:02:04
5楼2013-07-02 13:25:35
6楼2013-07-02 17:06:57
7楼2013-07-03 09:16:55
40