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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞培养后形态变得不太规则的因素
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dd812007135

木虫 (正式写手)

[求助] 细胞培养后形态变得不太规则的因素

HEla细胞经传代后，经12小时的培养后，观察有大量的圆亮点，以及细胞形态也变得不太规则，又不是污染的症状，高手们，请问是不是我操作上有什么问题？
1.吸除旧培养液，加入5MLPBS洗涤，重复一次。
2。加入1.5ML胰酶消化1分钟。
3。吸掉胰酶，加入5ML新鲜培养液，吹打（吹打时不知老是会有气泡）
4.移入离心管离心5分钟，倒掉上清液，加入1ML培养液，吹打。
5.在新培养瓶中加入5ml培养液，接入300ul细胞液。
6.放入培养箱培养。
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1楼 2012-03-29 11:50:53
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 鼓励交流~经验交流哈 2012-03-29 20:35:52
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 欢迎常来生物科学版交流 2012-03-30 19:07:58
细胞变圆应该是老化的原因，传代次数多了有变圆的细胞出现属正常现象。细胞形态不规则的问题，我培养的细胞也出现过，你往培养液里加点谷氨酰胺看看，谷氨酰胺在培养液中很不稳定，容易降解，需要一段时间后补加，具体配方你可以查一下，如有需要我也可以告诉你~  我在往培养液中加了谷氨酰胺后细胞的状态明显有好转，现在长得很好。祝实验顺利！
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dd812007135
3楼2012-03-29 20:18:36
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普通回帖

wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖提供有帮助的信息！ 2012-03-29 20:11:22
你加了胰酶不用血清终止的么？还是你的培养基里已经加好？吹打的时候最好不要起泡，对细胞的损伤还是比较大的，胰酶消化得好的话应该轻轻一吹就掉了。你说的十二小时的情况可能是由于部分细胞已经贴壁延伸，有的刚贴没延伸依旧处于圆形

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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我就是我
2楼2012-03-29 14:27:58
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dd812007135

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-03-29 20:18:36:
细胞变圆应该是老化的原因，传代次数多了有变圆的细胞出现属正常现象。细胞形态不规则的问题，我培养的细胞也出现过，你往培养液里加点谷氨酰胺看看，谷氨酰胺在培养液中很不稳定，容易降解，需要一段时间后补加， ...

4楼2012-04-04 00:52:26
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dd812007135

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-03-29 14:27:58:
你加了胰酶不用血清终止的么？还是你的培养基里已经加好？吹打的时候最好不要起泡，对细胞的损伤还是比较大的，胰酶消化得好的话应该轻轻一吹就掉了。你说的十二小时的情况可能是由于部分细胞已经贴壁延伸，有的刚 ...

5楼2012-04-04 00:53:16
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qiyuanmeimei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1. 根据细胞瓶面积，胰酶可能不需要加太多，加多了也会对细胞有伤害
2. 吹打时，让液体顺着瓶壁吹打，吸取培养液时不要吸取到气泡
3. 离心时间适当缩短一下也没关系，我之前就3分钟，离心力不要大了
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6楼2012-05-23 08:55:43
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