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dd812007135

木虫 (正式写手)

[求助] 细胞培养后形态变得不太规则的因素

HEla细胞经传代后,经12小时的培养后,观察有大量的圆亮点,以及细胞形态也变得不太规则,又不是污染的症状,高手们,请问是不是我操作上有什么问题?
1.吸除旧培养液,加入5MLPBS洗涤,重复一次。
2。加入1.5ML胰酶消化1分钟。
3。吸掉胰酶,加入5ML新鲜培养液,吹打(吹打时不知老是会有气泡)
4.移入离心管离心5分钟,倒掉上清液,加入1ML培养液,吹打。
5.在新培养瓶中加入5ml培养液,接入300ul细胞液。
6.放入培养箱培养。
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖提供有帮助的信息! 2012-03-29 20:11:22
你加了胰酶不用血清终止的么?还是你的培养基里已经加好?吹打的时候最好不要起泡,对细胞的损伤还是比较大的,胰酶消化得好的话应该轻轻一吹就掉了。你说的十二小时的情况可能是由于部分细胞已经贴壁延伸,有的刚贴没延伸依旧处于圆形

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
我就是我
2楼2012-03-29 14:27:58
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 鼓励交流~经验交流哈 2012-03-29 20:35:52
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 欢迎常来生物科学版交流 2012-03-30 19:07:58
细胞变圆应该是老化的原因,传代次数多了有变圆的细胞出现属正常现象。细胞形态不规则的问题,我培养的细胞也出现过,你往培养液里加点谷氨酰胺看看,谷氨酰胺在培养液中很不稳定,容易降解,需要一段时间后补加,具体配方你可以查一下,如有需要我也可以告诉你~  我在往培养液中加了谷氨酰胺后细胞的状态明显有好转,现在长得很好。祝实验顺利!

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3楼2012-03-29 20:18:36
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dd812007135

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-03-29 20:18:36:
细胞变圆应该是老化的原因,传代次数多了有变圆的细胞出现属正常现象。细胞形态不规则的问题,我培养的细胞也出现过,你往培养液里加点谷氨酰胺看看,谷氨酰胺在培养液中很不稳定,容易降解,需要一段时间后补加, ...

4楼2012-04-04 00:52:26
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dd812007135

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-03-29 14:27:58:
你加了胰酶不用血清终止的么?还是你的培养基里已经加好?吹打的时候最好不要起泡,对细胞的损伤还是比较大的,胰酶消化得好的话应该轻轻一吹就掉了。你说的十二小时的情况可能是由于部分细胞已经贴壁延伸,有的刚 ...

5楼2012-04-04 00:53:16
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qiyuanmeimei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1. 根据细胞瓶面积,胰酶可能不需要加太多,加多了也会对细胞有伤害
2. 吹打时,让液体顺着瓶壁吹打,吸取培养液时不要吸取到气泡
3. 离心时间适当缩短一下也没关系,我之前就3分钟,离心力不要大了
6楼2012-05-23 08:55:43
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