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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】细胞凋亡形态学观察 细胞爬片
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richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】细胞凋亡形态学观察 细胞爬片 已有6人参与

我最近在做细胞形体学染色观察，可是出现了些问题哦。希望高手能帮忙解决下哦
我是这样操作的：
1，将玻片置于六孔板，接种细胞               
2，给药，24h后洗尽培养基，PBS洗2遍，加入2ml 3.7% 多聚甲醛固 定10min
3，弃去固定液，PBS洗3遍，每次3min，洗尽液体
4，加入1ml（10微克/ml）hoechest33342，37度培养15min
PS: hoechest33342是用蒸馏水先配成1mg/ml，再用PBS稀释成10微克/ml后加入的。
有很多问题出现了：首先第一步中，接种细胞16小时后细胞在玻片上的贴壁效果不好，很多还是漂浮着。而且玻片下面不知怎么出现很多气泡，是不是我细胞爬片没做好，还是接种的细胞密度太大，还是其他什么原因。
第二步中，细胞固定10min后用PBS洗涤后感觉细胞没有完全固定，还是有漂浮的，不知道是不是固定的时间短了。最后加荧光染料，染色15min后，荧光显微镜观察荧光的强度很弱，我在想加入荧光染料染色后需不需要将液体弃去再观察？

我的操作步骤有没有问题啊？

做细胞凋亡形态学观察可不可以不用做细胞爬片，直接在板里接种，给药，荧光染料染色后观察啊？
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1楼 2009-12-13 16:23:19
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hounelson

金虫 (正式写手)
★
richenim(金币+1,VIP+0): 12-13 17:40
细胞贴壁不好的话，可用多聚赖氨酸浸片后放入培养板中
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2楼2009-12-13 17:06:02
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richenim

金虫 (小有名气)
★
狼狼晴空(金币+1,VIP+0):谢谢讨论 12-13 18:13
引用回帖:
Originally posted by hounelson at 2009-12-13 17:06:
细胞贴壁不好的话，可用多聚赖氨酸浸片后放入培养板中

我一直都是用玻璃培养瓶来培养细胞的，按道理来说应该是会贴在玻片上的啊。
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2009-12-13 17:41:47
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richenim

金虫 (小有名气)
是药学版块的人气不旺，还是高手不愿意来帮忙解答啊？！
那我自己顶吧，
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4楼2009-12-16 21:43:13
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xiaopangqd

银虫 (正式写手)
★ ★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供！ 12-20 21:36
richenim(金币+1,VIP+0): 12-23 22:20
你的细胞没有固定好，我的师兄是做神经细胞的，我们都是用4%的多聚甲醛固定的
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5楼2009-12-20 11:33:16
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琥珀色的黄昏

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
karl2100(金币+1):3Q 2010-02-12 20:31
首先你的玻片是不是处理好了。我们做试验时，玻片会用洗液处理，然后用75%酒精浸泡，使用前过火，使酒精挥发，然后置于干燥的六孔板中。待冷却后，接入细胞。
其次，多聚甲醛的浓度我们也是使用4%的。你可以试试。而且固定的时间可以自己摸索下。可以适当延长。
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6楼2010-02-12 11:01:52
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yjingmo

木虫 (著名写手)

修筑
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
karl2100(金币+1):谢谢回贴！ 2010-02-13 23:16
我用的80%的丙酮固定的，可能细胞不同，在这一块我还是外行，多多指教啊
赞一下(2人) 回复此楼
如果我成功了，那么我比别人幸运；如果我失败了，那么我还不够努力！
7楼2010-02-12 21:15:48
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3935

木虫 (正式写手)
学习了
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每天开心笑，累了就睡觉，醒了就微笑
8楼2010-02-13 14:48:33
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guoxi_7_7

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我师兄最近在做爬片，我也在旁边学习。仅供参考：
1、据我师兄说细胞接种后要使细胞贴壁，一般24小时。
2、多聚甲醛固定的意思不是说把细胞固定在片上，而是保持细胞形态。
3、细胞爬片24孔板一般细胞数为10000。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-07-29 12:46:37
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xiaoliudalu

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最好是用L多聚赖氨酸
有利于细胞的爬片
我感觉你试试吧
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-09-05 20:54:08
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