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richenim

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助】细胞凋亡形态学观察细胞爬片已有6人参与

我最近在做细胞形体学染色观察，可是出现了些问题哦。希望高手能帮忙解决下哦
我是这样操作的：
1，将玻片置于六孔板，接种细胞
2，给药，24h后洗尽培养基，PBS洗2遍，加入2ml 3.7% 多聚甲醛固定10min
3，弃去固定液，PBS洗3遍，每次3min，洗尽液体
4，加入1ml（10微克/ml）hoechest33342，37度培养15min
PS: hoechest33342是用蒸馏水先配成1mg/ml，再用PBS稀释成10微克/ml后加入的。
有很多问题出现了：首先第一步中，接种细胞16小时后细胞在玻片上的贴壁效果不好，很多还是漂浮着。而且玻片下面不知怎么出现很多气泡，是不是我细胞爬片没做好，还是接种的细胞密度太大，还是其他什么原因。
第二步中，细胞固定10min后用PBS洗涤后感觉细胞没有完全固定，还是有漂浮的，不知道是不是固定的时间短了。最后加荧光染料，染色15min后，荧光显微镜观察荧光的强度很弱，我在想加入荧光染料染色后需不需要将液体弃去再观察？

我的操作步骤有没有问题啊？

做细胞凋亡形态学观察可不可以不用做细胞爬片，直接在板里接种，给药，荧光染料染色后观察啊？

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