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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » MRC-5细胞培养问题
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xiangzi1987

铁虫 (初入文坛)

[求助] MRC-5细胞培养问题 已有2人参与

有哪位大虾有过培养MRC-5细胞的经验，可否具体传授一下需要注意哪些事项？为啥我们养的MRC-5细胞一直养不好。
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1楼 2013-01-09 13:18:53
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
正常养，3天传代一次，MEM+10%好一点的血清，这是从胚胎的肺提取的细胞，可以养四十几代，往后就老化了。不知道你养了多少代了。还有培养瓶用的什么瓶子，长得不好换瓶子试试，换血清试试。复苏代数靠前点的。
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2楼2013-01-09 13:29:16
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战歌2008

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个细胞我刚养过
不知道你是怎么个养不好！
我觉得有问题的最有可能的原因有两点。
首先，可能你拿到手的细胞就已经老化了，这个没有办法解决，只能重新引进。
其次，我觉得更有可能的一个原因是，你消化过度了，这种铺展的很开的细胞很容易消化过度。我的建议是把胰酶的浓度降低。加点PBS稀释。
这个细胞可以完全长满，消化后还是有很多的。
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7楼2013-01-10 10:22:43
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xiangzi1987

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by western虫 at 2013-01-09 13:29:16
正常养，3天传代一次，MEM+10%好一点的血清，这是从胚胎的肺提取的细胞，可以养四十几代，往后就老化了。不知道你养了多少代了。还有培养瓶用的什么瓶子，长得不好换瓶子试试，换血清试试。复苏代数靠前点的。

我们用的是康宁的培养瓶，就是普通的T25、T75的瓶子。复苏的代数是25代，养到30代左右就发现不行了，看似细胞数目很多，但一消化就发现没有多少了，而且消化时发现形状不规则，不知道为什么。
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3楼2013-01-09 13:35:02
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western虫

金虫 (小有名气)
细胞比较长，占空间，瓶子里本来就长不了多少，你可以少传点，1传2，消化控制时间，换另外批次的血清看看，你们细胞买的其他地方的，别人卖给你时可能已经很多代了，不排除细胞老化的可能
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ForDream！
4楼2013-01-09 16:12:47
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xiangzi1987

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by western虫 at 2013-01-09 16:12:47
细胞比较长，占空间，瓶子里本来就长不了多少，你可以少传点，1传2，消化控制时间，换另外批次的血清看看，你们细胞买的其他地方的，别人卖给你时可能已经很多代了，不排除细胞老化的可能

一般消化是多少时间?
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5楼2013-01-10 09:01:14
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western虫

金虫 (小有名气)
拿到显微镜下看，细胞缩短了就要终止
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6楼2013-01-10 09:13:35
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xiangzi1987

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by western虫 at 2013-01-10 09:13:35
拿到显微镜下看，细胞缩短了就要终止

我们在显微镜下看过，细胞缩短也就几秒钟的事，是不是这时候就应该终止？理想的消化状态不应该是圆球状吗？
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8楼2013-01-10 10:47:24
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xiangzi1987

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 战歌2008 at 2013-01-10 10:22:43
这个细胞我刚养过
不知道你是怎么个养不好！
我觉得有问题的最有可能的原因有两点。
首先，可能你拿到手的细胞就已经老化了，这个没有办法解决，只能重新引进。
其次，我觉得更有可能的一个原因是，你消化过度了 ...

我们用的是0.25%的GIBCO的胰酶，是不是浓度大了？
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9楼2013-01-10 10:48:39
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western虫

金虫 (小有名气)
可以用PBS稀释胰酶，也可以不稀释。消化的理想状态是大部分能吹打下来，不是自然变圆脱落
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ForDream！
10楼2013-01-10 13:58:43
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