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我听五月天

木虫 (正式写手)

[求助] 细胞培养过程中培养液变黄 已有11人参与

跟别人要的海拉细胞(DMEM培养的),传代两次后就挂了。期间,拿到细胞第二天就看到细胞轮廓开始变得不清晰、不透亮。之后细胞培养液(都是1640高糖)一天内就变黄,一天早晚换两次。后来轮廓更不清晰、细胞更不透亮。就改用DMEM培养,更换两次培养液后培养液浑浊了,显微镜下的细胞看上去都好像烧过的纸一样。就丢弃了。请教大神们这是什么原因?????
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为爱而生
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tinytan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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silicare: 金币+4, 谢谢参与 2013-12-24 18:03:25
1.有无染细真菌?2.细胞传代次数过多?3.培养箱校准?4.操作过于粗放?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2013-12-24 12:37:28
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普通回帖

刘璐19890614

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我听五月天: 金币+2, 有帮助 2013-12-27 16:25:49
是不是细胞本身有问题?不是很懂,来长知识的
加油
2楼2013-12-24 09:07:30
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2013-12-24 18:03:06
建议测试一下培养箱的CO2的浓度,后面变浑浊应该是细胞碎片吧,如果是染菌就没的说了。细胞在无污染条件下坏死,建议从理化性质去考虑,比如温度和CO2浓度是否要校正
ForDream!
3楼2013-12-24 12:31:37
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小米鲊

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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silicare: 金币+10, 处女贴,欢迎常来交流 2013-12-24 18:03:56
我听五月天: 金币+1, 有帮助 2013-12-25 14:03:20
细胞凋亡,但是培养液却快速变黄,先考虑下有没有污染吧。除却污染,是从别人在养的细胞分来的,还是别人冻存的?对方的冻存细胞的温度是?是否在冻存过程中有污染?
5楼2013-12-24 15:28:22
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gxc0824

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的血清灭活了吗?
6楼2013-12-25 01:21:05
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a6379137

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我听五月天: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-25 14:02:56
1640缓冲能力是不好,我用1640养hela时,传代后三四个小时就变黄了。但依然是两天传一次,细胞长得还可以。培养液浑浊,可能是死细胞太多,也可能是被污染了。另外,没明白你说的像烧过的纸一样是怎么回事,我怎么感觉我的hela长满了是这样的。。。
7楼2013-12-25 13:02:55
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我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by tinytan at 2013-12-24 12:37:28
1.有无染细真菌?2.细胞传代次数过多?3.培养箱校准?4.操作过于粗放?

Hela细胞是癌细胞不是能无限传代吗?操作时图方便,有时让别人做实验就让他给换液。我知道传代会影响细胞,正常细胞L-929,因为养成后暂时不用就消化过两次,每次大部分冻存,小部分继续培养,这样大概隔天甚至每天就要传代,是不是这样细胞很容易出问题啊?长满了就应该传成很多瓶?浑浊之前,当天晚上我觉得该传代(95%以上吧)但是懒没有做,只是换了液,第二天发现浑浊了,这样很不好吗?
为爱而生
8楼2013-12-25 14:00:54
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我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by gxc0824 at 2013-12-25 01:21:05
你的血清灭活了吗?

用的胎牛血清,不用灭活,不用过滤
为爱而生
9楼2013-12-25 14:01:55
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我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by western虫 at 2013-12-24 12:31:37
建议测试一下培养箱的CO2的浓度,后面变浑浊应该是细胞碎片吧,如果是染菌就没的说了。细胞在无污染条件下坏死,建议从理化性质去考虑,比如温度和CO2浓度是否要校正

培养箱会自动控制温度37和CO2浓度5%,有显示读数啊。我见它每几秒钟就注射一下CO2。
为爱而生
10楼2013-12-25 14:06:06
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