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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞培养过程中培养液变黄
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我听五月天

木虫 (正式写手)

[求助] 细胞培养过程中培养液变黄 已有11人参与

跟别人要的海拉细胞（DMEM培养的），传代两次后就挂了。期间，拿到细胞第二天就看到细胞轮廓开始变得不清晰、不透亮。之后细胞培养液（都是1640高糖）一天内就变黄，一天早晚换两次。后来轮廓更不清晰、细胞更不透亮。就改用DMEM培养，更换两次培养液后培养液浑浊了，显微镜下的细胞看上去都好像烧过的纸一样。就丢弃了。请教大神们这是什么原因？？？？？
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为爱而生
1楼 2013-12-23 15:59:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tinytan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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silicare: 金币+4, 谢谢参与 2013-12-24 18:03:25
1.有无染细真菌？2.细胞传代次数过多？3.培养箱校准？4.操作过于粗放？

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2013-12-24 12:37:28
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普通回帖

刘璐19890614

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我听五月天: 金币+2, ★有帮助 2013-12-27 16:25:49
是不是细胞本身有问题？不是很懂，来长知识的
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加油
2楼2013-12-24 09:07:30
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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silicare: 金币+2, 谢谢参与 2013-12-24 18:03:06
建议测试一下培养箱的CO2的浓度，后面变浑浊应该是细胞碎片吧，如果是染菌就没的说了。细胞在无污染条件下坏死，建议从理化性质去考虑，比如温度和CO2浓度是否要校正
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ForDream！
3楼2013-12-24 12:31:37
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小米鲊

铁虫 (初入文坛)

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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silicare: 金币+10, 处女贴，欢迎常来交流 2013-12-24 18:03:56
我听五月天: 金币+1, ★有帮助 2013-12-25 14:03:20
细胞凋亡，但是培养液却快速变黄，先考虑下有没有污染吧。除却污染，是从别人在养的细胞分来的，还是别人冻存的？对方的冻存细胞的温度是？是否在冻存过程中有污染？
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5楼2013-12-24 15:28:22
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gxc0824

银虫 (初入文坛)

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你的血清灭活了吗？
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6楼2013-12-25 01:21:05
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a6379137

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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我听五月天: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-25 14:02:56
1640缓冲能力是不好，我用1640养hela时，传代后三四个小时就变黄了。但依然是两天传一次，细胞长得还可以。培养液浑浊，可能是死细胞太多，也可能是被污染了。另外，没明白你说的像烧过的纸一样是怎么回事，我怎么感觉我的hela长满了是这样的。。。
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7楼2013-12-25 13:02:55
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我听五月天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tinytan at 2013-12-24 12:37:28
1.有无染细真菌？2.细胞传代次数过多？3.培养箱校准？4.操作过于粗放？

Hela细胞是癌细胞不是能无限传代吗？操作时图方便，有时让别人做实验就让他给换液。我知道传代会影响细胞，正常细胞L-929，因为养成后暂时不用就消化过两次，每次大部分冻存，小部分继续培养，这样大概隔天甚至每天就要传代，是不是这样细胞很容易出问题啊？长满了就应该传成很多瓶？浑浊之前，当天晚上我觉得该传代（95%以上吧）但是懒没有做，只是换了液，第二天发现浑浊了，这样很不好吗？
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为爱而生
8楼2013-12-25 14:00:54
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我听五月天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gxc0824 at 2013-12-25 01:21:05
你的血清灭活了吗？

用的胎牛血清，不用灭活，不用过滤
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为爱而生
9楼2013-12-25 14:01:55
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我听五月天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by western虫 at 2013-12-24 12:31:37
建议测试一下培养箱的CO2的浓度，后面变浑浊应该是细胞碎片吧，如果是染菌就没的说了。细胞在无污染条件下坏死，建议从理化性质去考虑，比如温度和CO2浓度是否要校正

培养箱会自动控制温度37和CO2浓度5%，有显示读数啊。我见它每几秒钟就注射一下CO2。
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为爱而生
10楼2013-12-25 14:06:06
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