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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于RPMI1640培养基
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 关于RPMI1640培养基

目前在培养正常的肝细胞和肝癌细胞，使用的培养基分别是用RPMI1640+20%FBS和RPMI1640+10%FBS。昨晚做正常细胞的传代实验，传完后才发现培养基下面有一些白色碎片状东西，然后将传的三盘细胞丢了两盘，留下一盘观察是否污染。今早来看，培养基没有浑浊，细胞贴壁效果很好，只是上面漂浮着一些死细胞，这可能是由于复苏后没传几代的缘故。自己不放心，又让师兄来看，师兄说细胞没有污染。但是放置冰箱中的培养基出现白色东西，却不知道如何解释。肿瘤细胞的培养基一直正常，而正常细胞的培养基已经是第二次出现这种东西了，我操作过程是一样的，为什么它老是出现白色东西？是污染吗？还是由于正常细胞培养基血清浓度高而出现的蛋白质结晶？希望有经验的人解答一下，万分感谢！
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1楼 2011-09-05 09:39:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

gloryping(金币+2): 2011-09-07 17:48:53
应该不是蛋白析出的问题，就算是纯血清也没有蛋白析出的，何况是稀释了的。除非你用的血清质量有问题。 细胞污染的话污染物也要同步生长且严重影响细胞生长，如果不是这种现象的话只能认为是杂质或者代谢产物，不影响的，不用理会。另外不建议你自己去离心或者二次过滤血清，商品血清都是无菌处理过的，你这样一折腾的话反而是画蛇添足了。死细胞在任何培养体系里都是不能完全避免的，最初复苏的时候是很严重的，后续培养时如果长时间不换液的话也会出现大量死亡，只要死亡量不是很大，活着的细胞状态仍然很好就可以无视死细胞。
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摒气动方息，宁神心自明。
5楼2011-09-07 15:32:43
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普通回帖

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-07 13:08:55
真菌污染的情况下，真菌可以和细胞共生的，各长各的
当然也可能是其他情况，不过20%的FBS，以前见别人配过，我自己都是用10%的，貌似没有会析出蛋白的印象...
赞一下(1人) 回复此楼
生活是美好的
2楼2011-09-06 16:52:23
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
adslye(金币+2): 你的这个反馈很哈！鼓励鼓励！ 2011-09-07 13:09:26
引用回帖:
2楼: Originally posted by nuoyaeva at 2011-09-06 16:52:23:
真菌污染的情况下，真菌可以和细胞共生的，各长各的
当然也可能是其他情况，不过20%的FBS，以前见别人配过，我自己都是用10%的，貌似没有会析出蛋白的印象...

细胞木事，长的挺好的，还用培养基做了试培实验，没有发现污染物。今天不放心，重新配置了培养基，发现血清的管底有一团东西，后来查到相关资料：血清中的絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理。所以应该没有问题了。O(∩_∩)O谢谢
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3楼2011-09-06 16:59:58
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gloryping at 2011-09-06 17:59:58:
细胞木事，长的挺好的，还用培养基做了试培实验，没有发现污染物。今天不放心，重新配置了培养基，发现血清的管底有一团东西，后来查到相关资料：血清中的絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白 ...

原来这这样，我也学习下~~
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生活是美好的
4楼2011-09-07 12:38:03
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

gloryping(金币+2): 2011-09-07 17:51:47
可能你的血清是热灭活的。若必须做血清的热灭活，请遵守56度，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不过容易堵塞滤器。这个一般不影响培养，没啥问题的。
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寝室楼的大爷、大妈都是哲学家，他们每天都在思考人类最根本的三个问题：你是谁？你从哪儿来？要去哪儿？
6楼2011-09-07 15:44:26
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pxmyz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

gloryping(金币+2): 2011-09-07 17:53:22
对于不放心的培养基或溶液可以再次过滤除菌。
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Ican，Ido.
7楼2011-09-07 16:50:45
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by terry130 at 2011-09-07 15:32:43:
应该不是蛋白析出的问题，就算是纯血清也没有蛋白析出的，何况是稀释了的。除非你用的血清质量有问题。 细胞污染的话污染物也要同步生长且严重影响细胞生长，如果不是这种现象的话只能认为是杂质或者代谢产物，不 ...

恩恩 O(∩_∩)O谢谢解答，学到了很多
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8楼2011-09-07 17:51:09
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by rb at 2011-09-07 15:44:26:
可能你的血清是热灭活的。若必须做血清的热灭活，请遵守56度，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不 ...

(⊙v⊙)嗯  血清就这样用了，没影响细胞生长。主要是我刚开始培养细胞，其实还没遇到污染，有时老是自己吓自己，O(∩_∩)O~
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9楼2011-09-07 17:53:13
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by pxmyz at 2011-09-07 16:50:45:
对于不放心的培养基或溶液可以再次过滤除菌。

培养基试培后木有问题，应该不会影响细胞生长了，O(∩_∩)O~
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10楼2011-09-07 17:53:55
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