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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 关于RPMI1640培养基

目前在培养正常的肝细胞和肝癌细胞,使用的培养基分别是用RPMI1640+20%FBS和RPMI1640+10%FBS。昨晚做正常细胞的传代实验,传完后才发现培养基下面有一些白色碎片状东西,然后将传的三盘细胞丢了两盘,留下一盘观察是否污染。今早来看,培养基没有浑浊,细胞贴壁效果很好,只是上面漂浮着一些死细胞,这可能是由于复苏后没传几代的缘故。自己不放心,又让师兄来看,师兄说细胞没有污染。但是放置冰箱中的培养基出现白色东西,却不知道如何解释。肿瘤细胞的培养基一直正常,而正常细胞的培养基已经是第二次出现这种东西了,我操作过程是一样的,为什么它老是出现白色东西?是污染吗?还是由于正常细胞培养基血清浓度高而出现的蛋白质结晶?希望有经验的人解答一下,万分感谢!
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

gloryping(金币+2): 2011-09-07 17:48:53
应该不是蛋白析出的问题,就算是纯血清也没有蛋白析出的,何况是稀释了的。除非你用的血清质量有问题。 细胞污染的话污染物也要同步生长且严重影响细胞生长,如果不是这种现象的话只能认为是杂质或者代谢产物,不影响的,不用理会。另外不建议你自己去离心或者二次过滤血清,商品血清都是无菌处理过的,你这样一折腾的话反而是画蛇添足了。死细胞在任何培养体系里都是不能完全避免的,最初复苏的时候是很严重的,后续培养时如果长时间不换液的话也会出现大量死亡,只要死亡量不是很大,活着的细胞状态仍然很好就可以无视死细胞。
摒气动方息,宁神心自明。
5楼2011-09-07 15:32:43
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普通回帖

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-07 13:08:55
真菌污染的情况下,真菌可以和细胞共生的,各长各的
当然也可能是其他情况,不过20%的FBS,以前见别人配过,我自己都是用10%的,貌似没有会析出蛋白的印象...
生活是美好的
2楼2011-09-06 16:52:23
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★
adslye(金币+2): 你的这个反馈很哈!鼓励鼓励! 2011-09-07 13:09:26
引用回帖:
2楼: Originally posted by nuoyaeva at 2011-09-06 16:52:23:
真菌污染的情况下,真菌可以和细胞共生的,各长各的
当然也可能是其他情况,不过20%的FBS,以前见别人配过,我自己都是用10%的,貌似没有会析出蛋白的印象...

细胞木事,长的挺好的,还用培养基做了试培实验,没有发现污染物。今天不放心,重新配置了培养基,发现血清的管底有一团东西,后来查到相关资料:血清中的絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理。所以应该没有问题了。O(∩_∩)O谢谢
3楼2011-09-06 16:59:58
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gloryping at 2011-09-06 17:59:58:
细胞木事,长的挺好的,还用培养基做了试培实验,没有发现污染物。今天不放心,重新配置了培养基,发现血清的管底有一团东西,后来查到相关资料:血清中的絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白 ...

原来这这样,我也学习下~~
生活是美好的
4楼2011-09-07 12:38:03
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

gloryping(金币+2): 2011-09-07 17:51:47
可能你的血清是热灭活的。若必须做血清的热灭活,请遵守56度,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不过容易堵塞滤器。这个一般不影响培养,没啥问题的。
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家,他们每天都在思考人类最根本的三个问题:你是谁?你从哪儿来?要去哪儿?
6楼2011-09-07 15:44:26
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pxmyz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

gloryping(金币+2): 2011-09-07 17:53:22
对于不放心的培养基或溶液可以再次过滤除菌。
Ican,Ido.
7楼2011-09-07 16:50:45
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by terry130 at 2011-09-07 15:32:43:
应该不是蛋白析出的问题,就算是纯血清也没有蛋白析出的,何况是稀释了的。除非你用的血清质量有问题。 细胞污染的话污染物也要同步生长且严重影响细胞生长,如果不是这种现象的话只能认为是杂质或者代谢产物,不 ...

恩恩 O(∩_∩)O谢谢解答,学到了很多
8楼2011-09-07 17:51:09
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by rb at 2011-09-07 15:44:26:
可能你的血清是热灭活的。若必须做血清的热灭活,请遵守56度,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不 ...

(⊙v⊙)嗯  血清就这样用了,没影响细胞生长。主要是我刚开始培养细胞,其实还没遇到污染,有时老是自己吓自己,O(∩_∩)O~
9楼2011-09-07 17:53:13
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by pxmyz at 2011-09-07 16:50:45:
对于不放心的培养基或溶液可以再次过滤除菌。

培养基试培后木有问题,应该不会影响细胞生长了,O(∩_∩)O~
10楼2011-09-07 17:53:55
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