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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » 鼠骨髓细胞（rat bone marrow cell）培养的一个问题，请教大家。谢谢
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westlover

银虫 (著名写手)

[求助] 鼠骨髓细胞（rat bone marrow cell）培养的一个问题，请教大家。谢谢

为了评价氧化锆陶瓷片体外成骨细胞反应，打算在其上面培养rat bone marrow cell，测试 cell attachment, ALP, morphology, bone nodule等等。还没开始。
我们实验室的方案是，初级培养7天，不使用osteoblast诱导药品，种植到试样之后再用诱导药。结果，前几天一个学长投稿，直接被拒，理由是：“Cell work has fundamental mistakes. The authors have not isolated the stem cell population from the bone marrow. Therefore, the cells for the experiments are likely to be monocytes/macrophages. And the cells should have been characterized for their phenotype prior to their use. ”
找了最近几篇发在Biomaterials上的文章，发现很多人的做法是：初级培养7天，一开始就已经用osteoblast诱导药品，种植到试样之后继续使用。
我们实验室的方案已经用了7、8年了，前面一大批学长学姐毕业都做RBM cell,难道他们都错了？
=============
各位大侠，到底标准程序是怎样的？
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1楼 2012-03-21 11:12:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

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markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-21 15:03:02
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:33
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:44:08
如果 骨髓 没有经过 流式细胞仪筛选
骨髓里面的确有单个核细胞 与msc 混淆
用密度梯度离心照样不能去除 单个核细胞
单个核细胞 与 msc 的确在形态、比重方面无显著差异

还有可能是 你没有提供 成骨细胞的鉴定照片
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3楼2012-03-21 14:15:32
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普通回帖

快乐丝丝

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-21 15:02:52
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:29
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:43:57
我们做BMC时，一般提骨髓至瓶或皿中，四天左右贴壁，然后换液同时算是纯化细胞，你可以把你的细胞流式测定下表面CD什么的以证明是。
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2楼2012-03-21 12:14:40
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liubin at 2012-03-21 14:15:32:
如果 骨髓 没有经过 流式细胞仪筛选
骨髓里面的确有单个核细胞 与msc 混淆
用密度梯度离心照样不能去除 单个核细胞
单个核细胞 与 msc 的确在形态、比重方面无显著差异

还有可能是 你没有提供 成骨细胞的鉴 ...

谢谢啊。如何确定是成骨细胞啊？
文献中，很多都是在分化药物诱导下培养7天，并没有确认完全转化。
======
重中之重，是不是从一开始培养就需要用分化诱导药品啊？
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4楼2012-03-22 11:31:33
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大海88

无虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-22 14:48:15
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:38
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:44:18
密度梯度离心  然后再流失筛选   再验证得到的是干细胞，在后续的7d常规培养再向成骨方向诱导
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5楼2012-03-22 14:38:49
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chenshixua

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-22 21:06:15
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:44:30
你没写你的BMSCs的分离、培养、纯化、鉴定的方法，不好给你评价
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6楼2012-03-22 19:03:21
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 快乐丝丝 at 2012-03-21 12:14:40:
我们做BMC时，一般提骨髓至瓶或皿中，四天左右贴壁，然后换液同时算是纯化细胞，你可以把你的细胞流式测定下表面CD什么的以证明是。

提取骨髓到培养瓶中，用的是含有osteoblast分化诱导药品的medium吗？换液后算是什么样纯化细胞？再培养几天然后种植？
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7楼2012-03-27 08:29:55
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chenshixua at 2012-03-22 19:03:21:
你没写你的BMSCs的分离、培养、纯化、鉴定的方法，不好给你评价

看了别人文献，如以下这篇文章，就没有提及纯化、鉴定方法，但是他们从分离培养之初就使用分化诱导药品，这行不行？
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8楼2012-03-27 08:31:41
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 大海88 at 2012-03-22 14:38:49:
密度梯度离心  然后再流失筛选   再验证得到的是干细胞，在后续的7d常规培养再向成骨方向诱导

我们实验室没有流式筛选，能不能像8楼那篇文章一样，一开始培养就用诱导药品？
谢谢
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9楼2012-03-27 08:36:12
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大海88

无虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lixiangde: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-27 09:19:51
westlover: 金币+1 2012-03-27 10:01:11
引用回帖:
9楼: Originally posted by westlover at 2012-03-27 08:36:12:
我们实验室没有流式筛选，能不能像8楼那篇文章一样，一开始培养就用诱导药品？
谢谢

一般大型教学医院会有流式筛选
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10楼2012-03-27 09:04:24
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