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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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westlover

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 鼠骨髓细胞(rat bone marrow cell)培养的一个问题,请教大家。谢谢

为了评价氧化锆陶瓷片体外成骨细胞反应,打算在其上面培养rat bone marrow cell,测试 cell attachment, ALP, morphology, bone nodule等等。还没开始。
我们实验室的方案是,初级培养7天,不使用osteoblast诱导药品,种植到试样之后再用诱导药。结果,前几天一个学长投稿,直接被拒,理由是:“Cell work has fundamental mistakes. The authors have not isolated the stem cell population from the bone marrow. Therefore, the cells for the experiments are likely to be monocytes/macrophages. And the cells should have been characterized for their phenotype prior to their use. ”
找了最近几篇发在Biomaterials上的文章,发现很多人的做法是:初级培养7天,一开始就已经用osteoblast诱导药品,种植到试样之后继续使用。
我们实验室的方案已经用了7、8年了,前面一大批学长学姐毕业都做RBM cell,难道他们都错了?
=============
各位大侠,到底标准程序是怎样的?
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liubin

禁虫

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-21 15:03:02
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:33
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:44:08
如果 骨髓 没有经过 流式细胞仪筛选
骨髓里面的确有单个核细胞 与msc 混淆
用密度梯度离心照样不能去除 单个核细胞
单个核细胞 与 msc 的确在形态、比重方面无显著差异

还有可能是 你没有提供 成骨细胞的鉴定照片
3楼2012-03-21 14:15:32
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普通回帖

快乐丝丝

实习版主

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【答案】应助回帖

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markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-21 15:02:52
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:29
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:43:57
我们做BMC时,一般提骨髓至瓶或皿中,四天左右贴壁,然后换液同时算是纯化细胞,你可以把你的细胞流式测定下表面CD什么的以证明是。
2楼2012-03-21 12:14:40
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westlover

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
3楼: Originally posted by liubin at 2012-03-21 14:15:32:
如果 骨髓 没有经过 流式细胞仪筛选
骨髓里面的确有单个核细胞 与msc 混淆
用密度梯度离心照样不能去除 单个核细胞
单个核细胞 与 msc 的确在形态、比重方面无显著差异

还有可能是 你没有提供 成骨细胞的鉴 ...

谢谢啊。如何确定是成骨细胞啊?
文献中,很多都是在分化药物诱导下培养7天,并没有确认完全转化。
======
重中之重,是不是从一开始培养就需要用分化诱导药品啊?
4楼2012-03-22 11:31:33
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大海88

专家顾问

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markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-22 14:48:15
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:38
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:44:18
密度梯度离心  然后再流失筛选   再验证得到的是干细胞,在后续的7d常规培养再向成骨方向诱导
5楼2012-03-22 14:38:49
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chenshixua

实习版主

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mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-22 21:06:15
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:44:30
你没写你的BMSCs的分离、培养、纯化、鉴定的方法,不好给你评价
6楼2012-03-22 19:03:21
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westlover

专家顾问

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 快乐丝丝 at 2012-03-21 12:14:40:
我们做BMC时,一般提骨髓至瓶或皿中,四天左右贴壁,然后换液同时算是纯化细胞,你可以把你的细胞流式测定下表面CD什么的以证明是。

提取骨髓到培养瓶中,用的是含有osteoblast分化诱导药品的medium吗?换液后算是什么样纯化细胞?再培养几天然后种植?
7楼2012-03-27 08:29:55
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westlover

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
6楼: Originally posted by chenshixua at 2012-03-22 19:03:21:
你没写你的BMSCs的分离、培养、纯化、鉴定的方法,不好给你评价

看了别人文献,如以下这篇文章,就没有提及纯化、鉴定方法,但是他们从分离培养之初就使用分化诱导药品,这行不行?





8楼2012-03-27 08:31:41
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westlover

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
5楼: Originally posted by 大海88 at 2012-03-22 14:38:49:
密度梯度离心  然后再流失筛选   再验证得到的是干细胞,在后续的7d常规培养再向成骨方向诱导

我们实验室没有流式筛选,能不能像8楼那篇文章一样,一开始培养就用诱导药品?
谢谢
9楼2012-03-27 08:36:12
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大海88

实习版主

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lixiangde: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-27 09:19:51
westlover: 金币+1 2012-03-27 10:01:11
引用回帖:
9楼: Originally posted by westlover at 2012-03-27 08:36:12:
我们实验室没有流式筛选,能不能像8楼那篇文章一样,一开始培养就用诱导药品?
谢谢

一般大型教学医院会有流式筛选
10楼2012-03-27 09:04:24
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