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fancysea

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请问大家如何培养hFOB1.19的啊？

请问各位版友，大家如何培养这株细胞的？
细胞是从中科院上海细胞库购买的hFOB1.19
我目前的培养方式是按照ATCC上面给的方法：F12: DMEM=1:1, 10%FBS, 0.3mg/ml G418, 34degree。
感觉我冻存了一次之后，细胞状态就开始下滑，增殖的速度减慢，而且细胞表面有不少微小的黑点，我不能确定是否染菌，因为细胞液一直都是澄清的。
之前是两天换液一次，后来改为每天都换液，也不见改善。
我换液的时候一般都有用PBS清洗残余培养基，不知道大家有没有这个习惯。
请问有培养过的同学，你们有在这株细胞的培养基中加双抗吗？还是有什么其他的注意事项，请一定不吝指教。谢谢：）

[ Last edited by fancysea on 2011-3-29 at 13:22 ]
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1楼 2011-03-29 13:18:16
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dj04164

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
fancysea(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+3): 很详细， 2011-03-30 09:51:10
fancysea(金币+5): 太感谢你了：） 2011-03-30 20:34:25
这株细胞不太好养，换液太频繁无助于细胞状态改善，有的时候反而不利。
换液前用pbs洗也没啥道理。
好像这个细胞帖壁不是太牢，换液的时候要小心。
抗生素对细胞生长基本没影响，加不加两可。
骨细胞不要种得太满也不要太稀。黑点一般不是染菌。
如果有支原体或者衣原体污染倒是会让细胞状态变差，而且不染色也看不出污染。尝试用hochest染一下看，以便确定。
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2楼2011-03-30 09:13:35
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fancysea

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dj04164 at 2011-03-30 09:13:35:
这株细胞不太好养，换液太频繁无助于细胞状态改善，有的时候反而不利。
换液前用pbs洗也没啥道理。
好像这个细胞帖壁不是太牢，换液的时候要小心。
抗生素对细胞生长基本没影响，加不加两可。
骨细胞不要种得 ...

再请教如果真是支原体或者衣原体感染的话，要怎么处理呢？是否所有细胞都要丢弃啊。。。那就崩溃了。。。
一般的药物对他们它们没有作用，看到有人用M-Plasmocin，不知道效果如何？
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3楼2011-03-30 21:08:26
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dj04164

木虫 (正式写手)
fancysea(金币+2): 好的，谢谢，我先确定一下。 2011-03-31 10:37:28
如果是支原体基本就是没救了，我不了解相关的处理办法，据说很麻烦，这种商业化的细胞株如果出现这种情况就没有必要留了。你先确定是否属于支原体污染再说。
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4楼2011-03-31 09:38:55
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