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westlover

银虫 (著名写手)

[求助] 鼠骨髓细胞(rat bone marrow cell)培养的一个问题,请教大家。谢谢

为了评价氧化锆陶瓷片体外成骨细胞反应,打算在其上面培养rat bone marrow cell,测试 cell attachment, ALP, morphology, bone nodule等等。还没开始。
我们实验室的方案是,初级培养7天,不使用osteoblast诱导药品,种植到试样之后再用诱导药。结果,前几天一个学长投稿,直接被拒,理由是:“Cell work has fundamental mistakes. The authors have not isolated the stem cell population from the bone marrow. Therefore, the cells for the experiments are likely to be monocytes/macrophages. And the cells should have been characterized for their phenotype prior to their use. ”
找了最近几篇发在Biomaterials上的文章,发现很多人的做法是:初级培养7天,一开始就已经用osteoblast诱导药品,种植到试样之后继续使用。
我们实验室的方案已经用了7、8年了,前面一大批学长学姐毕业都做RBM cell,难道他们都错了?
=============
各位大侠,到底标准程序是怎样的?
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大海88

无虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-22 14:48:15
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:38
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:44:18
密度梯度离心  然后再流失筛选   再验证得到的是干细胞,在后续的7d常规培养再向成骨方向诱导
5楼2012-03-22 14:38:49
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大海88

无虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lixiangde: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-27 09:19:51
westlover: 金币+1 2012-03-27 10:01:11
引用回帖:
9楼: Originally posted by westlover at 2012-03-27 08:36:12:
我们实验室没有流式筛选,能不能像8楼那篇文章一样,一开始培养就用诱导药品?
谢谢

一般大型教学医院会有流式筛选
10楼2012-03-27 09:04:24
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大海88

无虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lixiangde: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-27 09:20:01
westlover: 金币+2 2012-03-27 09:59:20
成骨细胞和骨髓细胞完全是两码事 ,,,这个编辑说了你们没有把干细胞纯化就行成骨方向诱导,,这样里边就有其他的细胞 ,,,所以先把干细胞筛选出来,,,再验证所筛选的是干细胞就是细胞表面标记三向分化这些很简单的,,,,再诱导    发最重要的是英文文章的这个你还是要筛选一下,,流式筛选或者免疫磁珠筛选都可以,,,但是被拒稿的编辑说了起码要有表型的检测,,biomaterials这篇文章  虽然没有提到这些可能是因为成骨细胞的培养相对来说是简单常规的方法,中间有些内容被省掉了,但是不代表人家没做,,,所以还是要严谨一些
11楼2012-03-27 09:18:47
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大海88

无虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-27 22:13:41
引用回帖:
13楼: Originally posted by westlover at 2012-03-27 09:58:56:
谢谢谢谢。
请问您,如果不进行筛选,投放称骨细胞诱导药品,其他细胞会不会自动消亡?培养7天,换液3-4次,可不可以得到纯化成骨细胞?
不好意思,理工科,不太懂。
还有,今天听这里的一个博后说,我们实验 ...

那不行啊  你这方法不科学 不会认可的,,还是我说的先筛选出干细胞  再验证  再诱导     其实也不难  大多数工作你都做了  就筛选和验证  再做一下      也可以用免疫磁珠筛选  你还是到你们学校学医学的问一下骨科的养间质干细胞的问问  比较简单的   我是医学的  做生物材料也是搞得很困惑   要是我们合作一下就好了
15楼2012-03-27 11:16:39
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大海88

无虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

忘了说  有成品的干细胞  你可以考虑
16楼2012-03-27 11:17:45
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