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westlover

银虫 (著名写手)

[求助] 鼠骨髓细胞(rat bone marrow cell)培养的一个问题,请教大家。谢谢

为了评价氧化锆陶瓷片体外成骨细胞反应,打算在其上面培养rat bone marrow cell,测试 cell attachment, ALP, morphology, bone nodule等等。还没开始。
我们实验室的方案是,初级培养7天,不使用osteoblast诱导药品,种植到试样之后再用诱导药。结果,前几天一个学长投稿,直接被拒,理由是:“Cell work has fundamental mistakes. The authors have not isolated the stem cell population from the bone marrow. Therefore, the cells for the experiments are likely to be monocytes/macrophages. And the cells should have been characterized for their phenotype prior to their use. ”
找了最近几篇发在Biomaterials上的文章,发现很多人的做法是:初级培养7天,一开始就已经用osteoblast诱导药品,种植到试样之后继续使用。
我们实验室的方案已经用了7、8年了,前面一大批学长学姐毕业都做RBM cell,难道他们都错了?
=============
各位大侠,到底标准程序是怎样的?
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大海88

无虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lixiangde: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-27 09:20:01
westlover: 金币+2 2012-03-27 09:59:20
成骨细胞和骨髓细胞完全是两码事 ,,,这个编辑说了你们没有把干细胞纯化就行成骨方向诱导,,这样里边就有其他的细胞 ,,,所以先把干细胞筛选出来,,,再验证所筛选的是干细胞就是细胞表面标记三向分化这些很简单的,,,,再诱导    发最重要的是英文文章的这个你还是要筛选一下,,流式筛选或者免疫磁珠筛选都可以,,,但是被拒稿的编辑说了起码要有表型的检测,,biomaterials这篇文章  虽然没有提到这些可能是因为成骨细胞的培养相对来说是简单常规的方法,中间有些内容被省掉了,但是不代表人家没做,,,所以还是要严谨一些
11楼2012-03-27 09:18:47
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快乐丝丝

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-21 15:02:52
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:29
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:43:57
我们做BMC时,一般提骨髓至瓶或皿中,四天左右贴壁,然后换液同时算是纯化细胞,你可以把你的细胞流式测定下表面CD什么的以证明是。
2楼2012-03-21 12:14:40
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liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-21 15:03:02
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:33
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:44:08
如果 骨髓 没有经过 流式细胞仪筛选
骨髓里面的确有单个核细胞 与msc 混淆
用密度梯度离心照样不能去除 单个核细胞
单个核细胞 与 msc 的确在形态、比重方面无显著差异

还有可能是 你没有提供 成骨细胞的鉴定照片
3楼2012-03-21 14:15:32
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westlover

银虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liubin at 2012-03-21 14:15:32:
如果 骨髓 没有经过 流式细胞仪筛选
骨髓里面的确有单个核细胞 与msc 混淆
用密度梯度离心照样不能去除 单个核细胞
单个核细胞 与 msc 的确在形态、比重方面无显著差异

还有可能是 你没有提供 成骨细胞的鉴 ...

谢谢啊。如何确定是成骨细胞啊?
文献中,很多都是在分化药物诱导下培养7天,并没有确认完全转化。
======
重中之重,是不是从一开始培养就需要用分化诱导药品啊?
4楼2012-03-22 11:31:33
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