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leileihmr

新虫 (初入文坛)

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[交流] 有人对293T细胞中的SV40大T抗原有研究么？

如题，SV40是致癌的，大T抗原（LTA）在293T中的表达是否也有致癌性？

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1楼 2012-02-01 14:45:29

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lixinnew027

至尊木虫 (著名写手)

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★
leileihmr(金币+1):谢谢参与

293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高，转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。
形态特点上皮细胞
致瘤性 +
产物或抗原大T抗原
染色体核型亚三倍体人细胞系。染色体众数为64，30%的细胞有64 条染色体。4.2%的细胞染色体数目更多。多数细胞der(1)t(1;15) (q42;q13), der(19)t(3;19) (q12;q13), der(12)t(8;12) (q22;p13),还有四条标记染色体，有的细胞另有5条标记染色体。der(1)与M8 (or Xq+)常常成对出现。N17 与 N22各有四条。值得注意的是多数细胞有三条X染色体，两条Xq+，一条Xp+。
生长特性粘附
文献评价 293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞。[RF32725]
表达转染的腺病毒5的基因。[RF32725]
早期报道认为此细胞含有Ad 5基因组左端和右端[RF32764]，现已清楚仅含有左端序列。[RF50113]
此细胞系人腺病毒滴度高。
室温不贴壁，37℃几日后重新贴壁。
表达由整合素beta-1 亚基与玻基结合素受体 alpha-v 亚基组成的玻基结合素细胞表面受体. [RF33793]
The Ad5 insert was cloned and sequenced, and it was determined that a colinear seqment from nts 1 to 4344 is integrated into chromosome 19 (19q13.2).

传代 293:弃培养基，含0.25% 胰酶, 0.03% EDTA 消化液洗涤，弃去，加1-2ml消化液室温或37℃消化。
加入新鲜培养基，吸出，分到新培养皿中。一传二至一传四。
293T:生长快，通常倍增时间不到一天。每3~4 天1：10至1：20稀释，5% CO2条件下培养。细胞贴壁疏松，可只用EDTA消化，不要用胰蛋白酶过度消化。

培养基更换每2-3天一次
冻存液 95%培养基；5%,DMSO；culture medium 95%; DMSO, 5%；
培养条件 ATCC培养基：90%的MEM Eagle，加入2mM L-谷氨酰胺，1.5g/L碳酸氢钠，0.1 mM必需氨基酸，1.0 mM 丙酮酸钠；10%加热灭活的马血清
37℃培养