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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】293T细胞里面有小颗粒，细胞不贴壁，无法继续培养
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薇sherry

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】293T细胞里面有小颗粒，细胞不贴壁，无法继续培养

我培养的293T细胞开始一直长的好好的，后来就出现很多小颗粒，像是细胞碎片一样的东西，第一次加大抗生素的量就救回来了，但是后来又出现了这样的情况，再养也养不活了，又拿了一支复苏，还是这样的情况，上个图，请各位给想想办法!
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1楼2011-02-18 10:38:44
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
这张图片不清晰  看不出细胞和碎片   又或者是你的超净台培养箱要定期消毒灭菌   别人的细胞也有你这样的问题吗
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2楼2011-02-18 13:27:32
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薇sherry

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wuw579 at 2011-02-18 13:27:32:
这张图片不清晰  看不出细胞和碎片   又或者是你的超净台培养箱要定期消毒灭菌   别人的细胞也有你这样的问题吗

我们的超净台培养箱都是定期消毒的，图片上基本上都是碎片，那两个圆形的是细胞，但是没有贴壁，现在复苏的细胞都是飘着的，贴壁的都是些碎片，没有正常的细胞形态，我们一个培养箱里还养了PK15，形态很正常
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3楼2011-02-18 13:34:56
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zhgqn

木虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-19 11:14:36
看着细胞像是凋亡了。应该是冻存的条件不合适或者复苏以后的培养条件不好。如果用抗生素能就回来，还有可能是污染了。。。如果碎片不停地动，培养基颜色变黄就是污染了。
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4楼2011-02-18 16:52:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-19 11:14:40
支原体污染
扔掉重新复苏
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5楼2011-02-18 17:02:53
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)

也许是你在冻存的时候细胞状态不好 又或者冻存时胰酶消化时间过长
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6楼2011-02-18 19:17:53
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_落落_

木虫 (初入文坛)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励分享个人经验 2011-02-18 20:47:38

我也碰到类似情况，不知道楼主用的什么牌子的小牛血清，如果是四季青的建议楼主换GIBCO的，养细胞之前先把培养箱全部清理下，具体什么污染可以上网查下黑胶虫。
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8楼2011-02-18 20:01:41
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microrex

铁虫 (初入文坛)

可能是黑胶虫
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9楼2011-02-19 11:04:41
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薇sherry

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by _落落_ at 2011-02-18 12:01:41:
我也碰到类似情况，不知道楼主用的什么牌子的小牛血清，如果是四季青的建议楼主换GIBCO的，养细胞之前先把培养箱全部清理下，具体什么污染可以上网查下黑胶虫。

我用的血清是GIBCO的，以前用四季青的血清反而还好些，因为细胞是从别的实验室要的，所以冻存的情况我不是很了解，碎片是不会动的，培养基颜色也没有变，所以推断应该不是污染，我把培养基也取了一部分一起培养，没有出现变浑浊的情况，我想也是细胞凋亡了，主要是细胞不贴壁这个问题很关键，以前我是传着传着细胞就不贴了，然后就出现这种情况。现在我自己没有细胞，所以没有条件一次一次的复苏，问题没找出来之前不敢再养了。
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10楼2011-02-19 11:13:18
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薇sherry

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhgqn at 2011-02-18 08:52:05:
看着细胞像是凋亡了。应该是冻存的条件不合适或者复苏以后的培养条件不好。如果用抗生素能就回来，还有可能是污染了。。。如果碎片不停地动，培养基颜色变黄就是污染了。

以前出现过一次，说是革兰氏阴性菌污染，我用抗生素是救回来了的，但是这次情况应该不一样，加了抗生素也没有什么反应
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11楼2011-02-19 11:15:40
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_落落_

木虫 (初入文坛)
薇sherry(金币+10): 别人实验室都没有养了，这是最郁闷的，还是谢谢 2011-02-22 14:34:16

从细胞源头处要一瓶正在养的细胞，再要来一点他们的培养基继续养，如果还出现此状况就是你们实验室环境的问题，如果生长良好再换你们实验室的小牛血清和培养基，看看是不是这两个出什么问题，如果都没问题那就是冻存出现的问题，还可以问问他们实验室复苏出现这种情况没，一点点排除可能的影响因素就找到原因了。
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12楼2011-02-20 10:04:42
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jora0418

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
图片给的不清楚啊？是不是细胞碎片？
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13楼2015-12-03 18:30:32
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zyxme7楼
2011-02-18 19:31   回复  
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