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薇sherry

银虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】293T细胞里面有小颗粒,细胞不贴壁,无法继续培养

我培养的293T细胞开始一直长的好好的,后来就出现很多小颗粒,像是细胞碎片一样的东西,第一次加大抗生素的量就救回来了,但是后来又出现了这样的情况,再养也养不活了,又拿了一支复苏,还是这样的情况,上个图,请各位给想想办法!
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)


这张图片不清晰  看不出细胞和碎片   又或者是你的超净台培养箱要定期消毒灭菌   别人的细胞也有你这样的问题吗
2楼2011-02-18 13:27:32
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薇sherry

银虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by wuw579 at 2011-02-18 13:27:32:
这张图片不清晰  看不出细胞和碎片   又或者是你的超净台培养箱要定期消毒灭菌   别人的细胞也有你这样的问题吗

我们的超净台培养箱都是定期消毒的,图片上基本上都是碎片,那两个圆形的是细胞,但是没有贴壁,现在复苏的细胞都是飘着的,贴壁的都是些碎片,没有正常的细胞形态,我们一个培养箱里还养了PK15,形态很正常
3楼2011-02-18 13:34:56
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zhgqn

木虫 (正式写手)



rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-19 11:14:36
看着细胞像是凋亡了。应该是冻存的条件不合适或者复苏以后的培养条件不好。如果用抗生素能就回来,还有可能是污染了。。。如果碎片不停地动,培养基颜色变黄就是污染了。
4楼2011-02-18 16:52:05
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rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-19 11:14:40
支原体污染
扔掉重新复苏
5楼2011-02-18 17:02:53
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)



也许是你在冻存的时候细胞状态不好 又或者冻存时胰酶消化时间过长
6楼2011-02-18 19:17:53
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_落落_

木虫 (初入文坛)


★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励分享个人经验 2011-02-18 20:47:38

我也碰到类似情况,不知道楼主用的什么牌子的小牛血清,如果是四季青的建议楼主换GIBCO的,养细胞之前先把培养箱全部清理下,具体什么污染可以上网查下黑胶虫。
8楼2011-02-18 20:01:41
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microrex

铁虫 (初入文坛)



可能是黑胶虫
9楼2011-02-19 11:04:41
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薇sherry

银虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by _落落_ at 2011-02-18 12:01:41:
我也碰到类似情况,不知道楼主用的什么牌子的小牛血清,如果是四季青的建议楼主换GIBCO的,养细胞之前先把培养箱全部清理下,具体什么污染可以上网查下黑胶虫。

我用的血清是GIBCO的,以前用四季青的血清反而还好些,因为细胞是从别的实验室要的,所以冻存的情况我不是很了解,碎片是不会动的,培养基颜色也没有变,所以推断应该不是污染,我把培养基也取了一部分一起培养,没有出现变浑浊的情况,我想也是细胞凋亡了,主要是细胞不贴壁这个问题很关键,以前我是传着传着细胞就不贴了,然后就出现这种情况。现在我自己没有细胞,所以没有条件一次一次的复苏,问题没找出来之前不敢再养了。
10楼2011-02-19 11:13:18
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薇sherry

银虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by zhgqn at 2011-02-18 08:52:05:
看着细胞像是凋亡了。应该是冻存的条件不合适或者复苏以后的培养条件不好。如果用抗生素能就回来,还有可能是污染了。。。如果碎片不停地动,培养基颜色变黄就是污染了。

以前出现过一次,说是革兰氏阴性菌污染,我用抗生素是救回来了的,但是这次情况应该不一样,加了抗生素也没有什么反应
11楼2011-02-19 11:15:40
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_落落_

木虫 (初入文坛)


薇sherry(金币+10): 别人实验室都没有养了,这是最郁闷的,还是谢谢 2011-02-22 14:34:16

从细胞源头处要一瓶正在养的细胞,再要来一点他们的培养基继续养,如果还出现此状况就是你们实验室环境的问题,如果生长良好再换你们实验室的小牛血清和培养基,看看是不是这两个出什么问题,如果都没问题那就是冻存出现的问题,还可以问问他们实验室复苏出现这种情况没,一点点排除可能的影响因素就找到原因了。
12楼2011-02-20 10:04:42
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jora0418

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
图片给的不清楚啊?是不是细胞碎片?
13楼2015-12-03 18:30:32
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简单回复
zyxme7楼
2011-02-18 19:31   回复  
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