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【求助/交流】贴壁细胞复苏死了
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Annel
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【求助/交流】贴壁细胞复苏死了
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大家好,我最近遇到一个很棘手的问题,我买的贴壁细胞刚拿回来挺好的,传代了几次也都很好,后来冻存了一些,结果复苏的时候一瓶都不活,根本不贴壁,慢慢就死了。请问是哪里出问题了呢?我之前用的gibco的1640,后来没货了就用的hyclone的,请问这些培养基配置的时候除了加胎牛血清和双抗还要加别的吗?我以前养的别的细胞就是直接按比例配好就行了,细胞活的挺好的。是培养基的问题吗?请高手帮帮忙啊
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1楼
2010-08-15 10:28:58
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liushuai1122
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2010-08-15 10:44:17
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Originally posted by
Annel
at 2010-08-15 10:28:58:
大家好,我最近遇到一个很棘手的问题,我买的贴壁细胞刚拿回来挺好的,传代了几次也都很好,后来冻存了一些,结果复苏的时候一瓶都不活,根本不贴壁,慢慢就死了。请问是哪里出问题了呢?我之前用的gibco的1640, ...
DMSO(10%)加了没有?还有,是不是你细胞冻存的时候细胞量比较少啊。
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2010-08-15 10:46:42
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sqhnsd
at 2010-08-15 10:46:42:
DMSO(10%)加了没有?还有,是不是你细胞冻存的时候细胞量比较少啊。
你好,加了的,我以前冻存细胞也是这样冻的,复苏都能活的,冻存的时候,25ml的培养瓶,一瓶冻两支冻存管,复苏观察培养瓶里细胞挺多的,但就是不贴壁,请指教,谢谢啦
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2010-08-15 10:53:00
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liushuai1122
at 2010-08-15 10:44:17:
可能冻存的时候出问题了
冻存的是加了完全培养基和10%的DMSO的,以前也是这样冻存别的细胞的,都能活,就是现在,都复苏了好几次了,第一天还看到有挺多沉到瓶底的,第二天就基本都飘起来了
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2010-08-15 10:54:44
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你放到-80冻存还是液氮?
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2010-08-15 10:58:06
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三磷酸腺苷
at 2010-08-15 10:58:06:
你放到-80冻存还是液氮?
-80℃冰箱的
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2010-08-15 11:03:49
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Annel
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-80℃冰箱的
可能是中途升温了吧……
-80不是放细胞的好地方,有些细胞很脆的,放-80很容易死掉
我就养过一两株细胞是这样的,液氮好好的,-80死得很难看
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8楼
2010-08-15 11:18:28
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rabbit9355
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细胞培养瓶的问题?或者冻存前后胎牛血清批次不一样?胎牛血清对细胞生长影响也很大的。
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9楼
2010-08-17 19:56:35
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