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Annel

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】贴壁细胞复苏死了已有5人参与

大家好,我最近遇到一个很棘手的问题,我买的贴壁细胞刚拿回来挺好的,传代了几次也都很好,后来冻存了一些,结果复苏的时候一瓶都不活,根本不贴壁,慢慢就死了。请问是哪里出问题了呢?我之前用的gibco的1640,后来没货了就用的hyclone的,请问这些培养基配置的时候除了加胎牛血清和双抗还要加别的吗?我以前养的别的细胞就是直接按比例配好就行了,细胞活的挺好的。是培养基的问题吗?请高手帮帮忙啊
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liushuai1122

木虫 (著名写手)

小虫虫


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可能冻存的时候出问题了
慎独!!!
2楼2010-08-15 10:44:17
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sqhnsd

金虫 (正式写手)


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引用回帖:
Originally posted by Annel at 2010-08-15 10:28:58:
大家好,我最近遇到一个很棘手的问题,我买的贴壁细胞刚拿回来挺好的,传代了几次也都很好,后来冻存了一些,结果复苏的时候一瓶都不活,根本不贴壁,慢慢就死了。请问是哪里出问题了呢?我之前用的gibco的1640, ...

DMSO(10%)加了没有?还有,是不是你细胞冻存的时候细胞量比较少啊。
3楼2010-08-15 10:46:42
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Annel

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-15 10:46:42:

DMSO(10%)加了没有?还有,是不是你细胞冻存的时候细胞量比较少啊。

你好,加了的,我以前冻存细胞也是这样冻的,复苏都能活的,冻存的时候,25ml的培养瓶,一瓶冻两支冻存管,复苏观察培养瓶里细胞挺多的,但就是不贴壁,请指教,谢谢啦
4楼2010-08-15 10:53:00
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Annel

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by liushuai1122 at 2010-08-15 10:44:17:
可能冻存的时候出问题了

冻存的是加了完全培养基和10%的DMSO的,以前也是这样冻存别的细胞的,都能活,就是现在,都复苏了好几次了,第一天还看到有挺多沉到瓶底的,第二天就基本都飘起来了
5楼2010-08-15 10:54:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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你放到-80冻存还是液氮?
6楼2010-08-15 10:58:06
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Annel

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-15 10:58:06:
你放到-80冻存还是液氮?

-80℃冰箱的
7楼2010-08-15 11:03:49
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-08-15 12:39:37
引用回帖:
Originally posted by Annel at 2010-08-15 11:03:49:

-80℃冰箱的

可能是中途升温了吧……
-80不是放细胞的好地方,有些细胞很脆的,放-80很容易死掉
我就养过一两株细胞是这样的,液氮好好的,-80死得很难看
8楼2010-08-15 11:18:28
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rabbit9355

铁虫 (初入文坛)


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细胞培养瓶的问题?或者冻存前后胎牛血清批次不一样?胎牛血清对细胞生长影响也很大的。
9楼2010-08-17 19:56:35
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