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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】贴壁细胞复苏死了
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Annel

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】贴壁细胞复苏死了 已有5人参与

大家好，我最近遇到一个很棘手的问题，我买的贴壁细胞刚拿回来挺好的，传代了几次也都很好，后来冻存了一些，结果复苏的时候一瓶都不活，根本不贴壁，慢慢就死了。请问是哪里出问题了呢？我之前用的gibco的1640，后来没货了就用的hyclone的，请问这些培养基配置的时候除了加胎牛血清和双抗还要加别的吗？我以前养的别的细胞就是直接按比例配好就行了，细胞活的挺好的。是培养基的问题吗？请高手帮帮忙啊
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1楼 2010-08-15 10:28:58
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liushuai1122

木虫 (著名写手)

小虫虫
★
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可能冻存的时候出问题了
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慎独！！！
2楼2010-08-15 10:44:17
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by Annel at 2010-08-15 10:28:58:
大家好，我最近遇到一个很棘手的问题，我买的贴壁细胞刚拿回来挺好的，传代了几次也都很好，后来冻存了一些，结果复苏的时候一瓶都不活，根本不贴壁，慢慢就死了。请问是哪里出问题了呢？我之前用的gibco的1640， ...

DMSO（10%）加了没有？还有，是不是你细胞冻存的时候细胞量比较少啊。
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3楼2010-08-15 10:46:42
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Annel

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-15 10:46:42:

DMSO（10%）加了没有？还有，是不是你细胞冻存的时候细胞量比较少啊。

你好，加了的，我以前冻存细胞也是这样冻的，复苏都能活的，冻存的时候，25ml的培养瓶，一瓶冻两支冻存管，复苏观察培养瓶里细胞挺多的，但就是不贴壁，请指教，谢谢啦
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4楼2010-08-15 10:53:00
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Annel

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liushuai1122 at 2010-08-15 10:44:17:
可能冻存的时候出问题了

冻存的是加了完全培养基和10%的DMSO的，以前也是这样冻存别的细胞的，都能活，就是现在，都复苏了好几次了，第一天还看到有挺多沉到瓶底的，第二天就基本都飘起来了
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5楼2010-08-15 10:54:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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你放到-80冻存还是液氮？
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6楼2010-08-15 10:58:06
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Annel

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-15 10:58:06:
你放到-80冻存还是液氮？

-80℃冰箱的
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7楼2010-08-15 11:03:49
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-08-15 12:39:37
引用回帖:
Originally posted by Annel at 2010-08-15 11:03:49:

-80℃冰箱的

可能是中途升温了吧……
-80不是放细胞的好地方，有些细胞很脆的，放-80很容易死掉
我就养过一两株细胞是这样的，液氮好好的，-80死得很难看
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8楼2010-08-15 11:18:28
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rabbit9355

铁虫 (初入文坛)
★
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细胞培养瓶的问题？或者冻存前后胎牛血清批次不一样？胎牛血清对细胞生长影响也很大的。
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9楼2010-08-17 19:56:35
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