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apple1057

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】一次性细胞培养瓶最长使用时间 已有9人参与

大家好,我们实验室最近刚复苏了一些细胞,可能是细胞状态不太好,细胞长得很慢。然后我们就一直让细胞长,但过了一段时间发现细胞全部漂浮起来,我们操作没有什么问题,我想问问是不是培养的时间太长,培养瓶内存流了太多刺激产物导致的细胞死亡呢?一开始细胞贴壁了,最后又都漂浮,有高手知道是为什么吗?另外,细胞在培养瓶和96孔板中都是边缘丰度很大,中间很少,这是为什么呢?谢谢
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
边缘多中间少与培养器皿应该没关系吧
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
2楼2010-11-11 15:37:14
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-11-11 21:44:15
复苏的细胞多久第一次换液?我怀疑是楼主一直不换液使得DMSO没有被除掉。
第二个问题,培养瓶边缘细胞丰度大,如果楼主用的是玻璃瓶可能是瓶子内部不平导致的。96孔板里面的细胞就有长在边上的特征,换24孔板就去中间了,我养悬浮细胞的时候这种现象更明显。
3楼2010-11-11 16:05:11
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熊鹰

铁虫 (初入文坛)

可能是时间太久了吧
4楼2010-11-11 16:49:48
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zhrei98

禁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
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5楼2010-11-11 17:02:12
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
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amisking(金币+2):good! 2010-11-11 21:44:26
细胞状态不好时,生长缓慢时,可以经常换液,保持营养充足和代谢废物的低浓度。

用孔板培养细胞时,加入细胞时不要旋转混匀。将培养板前后左右倾斜混匀(十字交叉)。
6楼2010-11-11 21:27:39
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leo_stu

铁虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★ ★
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scelab(金币+5):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-11 23:17:06
想过细胞可谓是比吃的饭多。 我来回答下楼主吧。
你的细胞可能在取出来的时候不太好了。 幸好,刚出来还可以贴。 建议24小时后换液。 你最好用6孔板先,让细胞有聚焦效应。 长多了后,才分到96孔做实验
-------------------------Science,Cell,Nature---------------
7楼2010-11-11 23:04:00
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leo_stu

铁虫 (初入文坛)

★ ★
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lstt09nk(金币+1):感谢交流 2010-11-12 09:17:49
附加,必要的时候换别的培养基试试。 板一定要用好的,如Corning的。 刚接下去的时候,一定要保证有一定的密度,且均匀。
-------------------------Science,Cell,Nature---------------
8楼2010-11-11 23:06:19
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apple1057

新虫 (初入文坛)

我想请问96孔板如何旋转混匀啊?还有如何将培养板前后左右倾斜混匀,这个方法我以前没听过,我是新手。谢谢
9楼2010-11-12 10:33:49
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apple1057

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by Rubisco580 at 2010-11-11 16:05:11:
复苏的细胞多久第一次换液?我怀疑是楼主一直不换液使得DMSO没有被除掉。
第二个问题,培养瓶边缘细胞丰度大,如果楼主用的是玻璃瓶可能是瓶子内部不平导致的。96孔板里面的细胞就有长在边上的特征,换24孔板就去 ...

谢谢,不过我们实验室都是用复苏后加培养基离心的方法,不会受到DMSO的影响的。
10楼2010-11-12 10:43:28
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