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纯渴

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[求助] 电镜观察中空膜上细胞的贴壁情况

本人在做细胞贴在中空纤维膜方面的实验，养了一段时间，想去用扫描电镜观察细胞是否贴在膜上，但是对样本处理不是很清楚，想请教下各位高手！
我看文献发现，2.5%戊二醛前固定，其他的没怎么说

请各位高手指点下详细步骤，跪谢了

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1楼2011-08-09 21:13:40

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kaobo2012

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
纯渴(金币+3): 希望还能补充回答下 2011-08-10 20:59:45
看天(金币+2): 鼓励一下 2011-08-10 21:57:40

1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。
甲醛(40%)　100 ml
无水磷酸氢二钠 6.5 g
磷酸二氢钠　4.0g
蒸馏水　900 ml
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多聚甲醛：主要用于培养细胞的固定。

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2楼2011-08-10 15:55:58

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纯渴

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送鲜花一朵

谢谢，我看到做扫描电镜前　：取出平板
膜, PBS全面漂洗后,以2. 5%戊二醛固定过夜,常规方法制备
电镜标本,在扫描电镜(AMRAYMODEL 1000B)下观察。
就是不知道这个戊二醛用什么来溶解，还有放在配好的放哪里固定，直接把膜放进2. 5%戊二醛溶液中吗？常规的电镜标本怎么制备的
本人新手，还望不吝赐教

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3楼2011-08-10 20:59:09

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kaobo2012

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 纯渴 at 2011-08-10 20:59:09:
谢谢，我看到做扫描电镜前　：取出平板
膜, PBS全面漂洗后,以2. 5%戊二醛固定过夜,常规方法制备
电镜标本,在扫描电镜(AMRAYMODEL 1000B)下观察。
就是不知道这个戊二醛用什么来溶解，还有放在配好的放哪里固定 ...

具体我不是很清楚，我不做你那个方向。我做的东西，老板有时问起来，我还摸不着北呢！不好意思！

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4楼2011-08-12 13:49:29

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