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纯渴

金虫 (正式写手)

[求助] 电镜观察中空膜上细胞的贴壁情况

本人在做细胞贴在中空纤维膜方面的实验,养了一段时间,想去用扫描电镜观察细胞是否贴在膜上,但是对样本处理不是很清楚,想请教下各位高手!
我看文献发现,2.5%戊二醛前固定,其他的没怎么说

请各位高手指点下详细步骤,跪谢了
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纯渴

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
谢谢,我看到做扫描电镜前 :取出平板
膜, PBS全面漂洗后,以2. 5%戊二醛固定过夜,常规方法制备
电镜标本,在扫描电镜(AMRAYMODEL 1000B)下观察。
就是不知道这个戊二醛用什么来溶解,还有放在配好的放哪里固定,直接把膜放进2. 5%戊二醛溶液中吗?常规的电镜标本怎么制备的
本人新手,还望不吝赐教
3楼2011-08-10 20:59:09
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
纯渴(金币+3): 希望还能补充回答下 2011-08-10 20:59:45
看天(金币+2): 鼓励一下 2011-08-10 21:57:40
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:最常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
甲醛(40%) 100 ml
无水磷酸氢二钠 6.5 g
磷酸二氢钠 4.0g
蒸馏水 900 ml
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多聚甲醛:主要用于培养细胞的固定。
2楼2011-08-10 15:55:58
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 纯渴 at 2011-08-10 20:59:09:
谢谢,我看到做扫描电镜前 :取出平板
膜, PBS全面漂洗后,以2. 5%戊二醛固定过夜,常规方法制备
电镜标本,在扫描电镜(AMRAYMODEL 1000B)下观察。
就是不知道这个戊二醛用什么来溶解,还有放在配好的放哪里固定 ...

具体我不是很清楚,我不做你那个方向。我做的东西,老板有时问起来,我还摸不着北呢!不好意思!
4楼2011-08-12 13:49:29
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