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toni-2009金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助】求教肝细胞原代培养! 已有8人参与
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Sample Text 前一段时间养了一下肝原代细胞(昆明小鼠与金黄地鼠),养得还行,贴壁铺展得都很好,但是最近养却贴壁还行,但是却不铺展开,向高手请教肝细胞原代培养应该注意什么,有何高见!在此谢了  |
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你好，我们实验室也在培养大鼠原代肝细胞，也是采用灌流法培养的，长得都很好，现在对肝细胞培养已经很成熟了。这个是我们实验的方法，希望对你有所帮助。 培养基本操作方法 a.将小/大鼠进行麻醉，待其进入深度麻醉状态后迅速将其固定于解剖板上，于超净台中解剖，暴露肝脏； b.沿肝门静脉插管固定，灌流前灌流液T1（37℃下预热），流速5ml/min，待肝脏膨胀后迅速剪断下腔静脉, 灌流15min； c.前灌流液灌流完后，立即灌流后灌流液T2（37℃下预热），流速3ml/min，5-10min； d.取下肝脏，置于平皿中，冰上剪碎肝组织，200目滤网过滤；用基础培养基清洗网上组织； e.收集滤液，600rpm 离心2min；重复一次； f.弃上清，往沉淀中加2ml完全培养基，重悬细胞后，台盼蓝染色计数，将细胞接种至鼠尾胶原包被的25cm2培养瓶中，37℃ 5%CO2培养箱中培养观察。 PS:现实验室要清原代细胞库存，有需要的同行可以与我联系哦，完全是帮大家节省时间哦。0510-86419770或者发邮件：mi.fang@chiscientific.cn |
9楼2012-05-17 14:14:43
lamborghini_
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