应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】求教肝细胞原代培养!
161/2返回列表12下一页
查看: 3042  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

toni-2009

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】求教肝细胞原代培养! 已有8人参与

Sample Text
前一段时间养了一下肝原代细胞(昆明小鼠与金黄地鼠),养得还行,贴壁铺展得都很好,但是最近养却贴壁还行,但是却不铺展开,向高手请教肝细胞原代培养应该注意什么,有何高见!在此谢了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-02 15:35:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chiscien

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，我们实验室也在培养大鼠原代肝细胞，也是采用灌流法培养的，长得都很好，现在对肝细胞培养已经很成熟了。这个是我们实验的方法，希望对你有所帮助。
培养基本操作方法
a.将小/大鼠进行麻醉，待其进入深度麻醉状态后迅速将其固定于解剖板上，于超净台中解剖，暴露肝脏；
b.沿肝门静脉插管固定，灌流前灌流液T1（37℃下预热），流速5ml/min，待肝脏膨胀后迅速剪断下腔静脉, 灌流15min；
c.前灌流液灌流完后，立即灌流后灌流液T2（37℃下预热），流速3ml/min，5-10min；
d.取下肝脏，置于平皿中，冰上剪碎肝组织，200目滤网过滤；用基础培养基清洗网上组织；
e.收集滤液，600rpm 离心2min；重复一次；
f.弃上清，往沉淀中加2ml完全培养基，重悬细胞后，台盼蓝染色计数，将细胞接种至鼠尾胶原包被的25cm2培养瓶中，37℃ 5%CO2培养箱中培养观察。
PS:现实验室要清原代细胞库存，有需要的同行可以与我联系哦，完全是帮大家节省时间哦。0510-86419770或者发邮件：mi.fang@chiscientific.cn
赞一下(3人) 回复此楼
9楼2012-05-17 14:14:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lamborghini_

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2397885楼: Originally posted by chiscien at 2012-05-17 14:14:43
你好，我们实验室也在培养大鼠原代肝细胞，也是采用灌流法培养的，长得都很好，现在对肝细胞培养已经很成熟了。这个是我们实验的方法，希望对你有所帮助。
培养基本操作方法
a.将小/大鼠进行麻醉，待其进入深度麻 ...

你好，我想请教一下你。我在提取细胞时第一步灌流和你所说的方法有所不同，我是把肝脏取出后，再插管，用棉线绑紧管子，肝脏就会膨胀起来，然后依次灌流。其他的步骤大同小异，但是每次提取都不成功，细胞活性不高，也不知道是什么地方出现问题。我猜也许是第二步灌流时间拿捏不准，请问你在用灌流液2消化时是怎么判断细胞已经消化可以停止灌流了？
赞一下(1人) 回复此楼
以勤奋为信仰者必成大器
10楼2013-03-21 21:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

toni-2009

金虫 (小有名气)

没人回应呢！

自己顶起来好了
回复此楼
2楼2010-11-03 16:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rf1055

银虫 (初入文坛)
toni-2009(金币+2):谢谢:) 2010-11-05 15:26:59
培养基有问题没有？营养素够了吗？污染没有？
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-05 14:46:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

toni-2009

金虫 (小有名气)

培养基和上次的一样

培养基和之前的一样,整个灌流过程也一样就是上次是昆明小鼠,这次换成了C57,还有发现配置的培养基(不完全培养基)放时间长了(10天)颜色变了偏酸性了,应该不是染菌,但是我里面加了VC,是不是和这个有关?
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-05 15:26:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纯渴

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
肝细胞在体外本身很难长得，一般要加胶原或明胶使其跟好的贴壁，自己养到两周左右就开始凋亡的差不多了，也许这种细胞在体外本身就是这样的吧
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-03 17:42:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mc0326

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我们用SD大鼠进行肝灌流，用William E培养基，比其他普通的培养基好很多，如果要求贴壁的话，可以试一试三明治培养法，先铺一层胶，在接种细胞，再铺一层，贴壁贴的很好，楼上说的I型胶原或Matrix胶都可以。
这个实验本来就很难做，多试几次吧，别灰心
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-03-06 15:11:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼娃娃瑶瑶

新虫 (初入文坛)
楼主也在养地鼠肝脏原代细胞么？我的细胞前阵子贴壁很好，但是这次不行了，我在培养基里面加入了HEPES和谷氨酰胺，有关系么？您说？
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-09 09:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼娃娃瑶瑶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2388993楼: Originally posted by mc0326 at 2012-03-06 15:11:13:
我们用SD大鼠进行肝灌流，用William E培养基，比其他普通的培养基好很多，如果要求贴壁的话，可以试一试三明治培养法，先铺一层胶，在接种细胞，再铺一层，贴壁贴的很好，楼上说的I型胶原或Matrix胶都可以。
这个 ...

那请问，灌流时间是多长呢？这次我灌流就觉得效果不是很好~~是不是时间过长了也不好呢？
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-09 09:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 toni-2009 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +3 zju2000 2026-09-26 3/150 2026-09-27 16:26 by lala1008
[硕博家园] 上海工程技术大学 激光智能制造课题组 2027级博士研究生招生 +5 oxidpl 2026-09-20 7/350 2026-09-27 10:43 by Equinoxhua
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:21 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:03 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
[教师之家] 课题组招2027级博士 上海工程技术大学 激光智能制造方向 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:37 by oxidpl
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭