应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 肝细胞培养问题！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
201/2返回列表12下一页
查看: 2916  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1989zb

金虫 (小有名气)

[求助] 肝细胞培养问题！ 已有2人参与

有没有人知道，做肝细胞，怎么除去里面的脂肪呢？？刚分离出来的肝细胞，还很多，第二天就很少了 还不怎么贴壁，这是什么原因呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-25 09:38:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1989zb: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-02-25 16:52:19
我长期从事鱼类各种组织细胞的原代培养。大黄鱼、欧洲鳗鲡、日本鳗鲡、眼斑拟石首鱼的肝脏都是有培养过的。最终也能成功建细胞系。肝细胞原代培养的确看起来非常脏
首先很重要的是你们用的是什么动物的肝脏。其次培养基、培养温度、CO2、培养条件等等的。
关于肝脏培养的方法有很多，我最喜欢用的有两种：组织块干贴和胰酶消化组织块悬液两种办法，各有优缺点吧。
培养肝细胞里面飘着的“脂肪”状的杂质的确很多，但是根据我原代培养的经验其实这些杂质是没有影响的。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-02-25 12:26:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-25 12:26:09
我长期从事鱼类各种组织细胞的原代培养。大黄鱼、欧洲鳗鲡、日本鳗鲡、眼斑拟石首鱼的肝脏都是有培养过的。最终也能成功建细胞系。肝细胞原代培养的确看起来非常脏
首先很重要的是你们用的是什么动物的肝脏。其次培 ...

嗯 我培养的是鸭胚肝细胞，就是刚分离出来的肝细胞在细胞瓶里面 看着很浑浊，，还想着怎么去除那类似脂肪的东西  刚分离出来细胞瓶里面还是很多，过了几个小时在看，就很少了  
请教哈你用胰酶消化胰酶的浓度以及消化时间是多少呢？？
可以把你的方法给我一份吗？
赞一下 回复此楼
3楼2014-02-25 16:52:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ifyousee

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-25 16:52:08
嗯 我培养的是鸭胚肝细胞，就是刚分离出来的肝细胞在细胞瓶里面 看着很浑浊，，还想着怎么去除那类似脂肪的东西  刚分离出来细胞瓶里面还是很多，过了几个小时在看，就很少了  
请教哈你用胰酶消化胰酶的浓度以及 ...

胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中，过个5分钟晃动一下，成乳糜状就可以了，觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净。另外脂肪我觉得是真没有影响。
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-27 10:02:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-27 10:02:31
胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中，过个5分钟晃动一下，成乳糜状就可以了，觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净 ...

做了好几次了，都不怎么贴壁，你做的效果好吗？
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-27 12:49:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-27 10:02:31
胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中，过个5分钟晃动一下，成乳糜状就可以了，觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净 ...

你一般是刚分离出来，什么时候首次换液呢？？首次换液后，每隔多久在换呢？
赞一下 回复此楼
6楼2014-02-27 12:51:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-27 10:02:31
胰酶消化装到15mL离心管或是2mL EP管中，过个5分钟晃动一下，成乳糜状就可以了，觉得杂质多100目的筛绢过滤一下。飘在上面的脂肪15mL离心管1000rpm离个5min密度较轻的那一层基本是飘在上面的。但是也别指望去太干净 ...

我3000rpm离心5min，分离出来细胞挺多的，就是不贴壁！但是用1500rpm离心，得到的细胞就很少了。

还有个问题，你用的细胞瓶是透气的还是不透气的呢？
赞一下 回复此楼
7楼2014-02-27 17:43:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-27 17:43:24
我3000rpm离心5min，分离出来细胞挺多的，就是不贴壁！但是用1500rpm离心，得到的细胞就很少了。

还有个问题，你用的细胞瓶是透气的还是不透气的呢？...

不透气的。但是透气的也可以。透气的就必须在CO2恒湿培养箱，不透气的可以在干式培养箱培养。
赞一下 回复此楼
8楼2014-02-28 12:56:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ifyousee

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-27 12:51:23
你一般是刚分离出来，什么时候首次换液呢？？首次换液后，每隔多久在换呢？...

看下20-30%覆盖的时候就可以换液了，基本上1-2天
赞一下 回复此楼
9楼2014-02-28 12:58:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 1989zb at 2014-02-27 12:49:34
做了好几次了，都不怎么贴壁，你做的效果好吗？...

挺好的呀，不好怎么建细胞系啊
赞一下 回复此楼
10楼2014-02-28 12:58:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员1uJ5pW 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西交大080500材料学硕349 +6 jqx1258 2026-03-31 7/350 2026-03-31 21:08 by yuq
[考研] 342求调剂 +7 Mary Keen 2026-03-28 7/350 2026-03-31 20:36 by 83503孙老师
[考研] 调剂 +4 好好读书。 2026-03-28 6/300 2026-03-31 20:35 by 好好读书。
[考研] 已决定调剂院校 +8 JKSOIID 2026-03-26 8/400 2026-03-31 19:51 by mg1014
[考研] 286分调剂 +11 Faune 2026-03-30 13/650 2026-03-31 17:28 by michael2011
[考研] 322求调剂：一志愿湖南大学 材料与化工（085600），已过六级。 +10 XX小邓 2026-03-29 10/500 2026-03-31 16:46 by 不吃魚的貓
[考研] 材料专硕调剂 +13 椰椰。 2026-03-29 13/650 2026-03-31 16:37 by hypershenger
[考研] 362求调剂 +9 西南交材料专硕3 2026-03-31 9/450 2026-03-31 16:25 by w虫虫123
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +6 Ong3 2026-03-27 6/300 2026-03-31 15:18 by yanflower7133
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +6 恬淡ye 2026-03-31 7/350 2026-03-31 11:28 by 恬淡ye
[考研] 085600 286分 材料求调剂 +11 麻辣鱿鱼 2026-03-27 12/600 2026-03-30 19:33 by Wang200018
[考研] 085600，材料与化工321分求调剂 +10 大馋小子 2026-03-28 10/500 2026-03-29 23:35 by 飞行日记西
[考研] 356求调剂 +4 gysy?s?a 2026-03-28 4/200 2026-03-29 10:32 by 唐沐儿
[考研] 321求调剂 +7 璞玉~~ 2026-03-25 8/400 2026-03-29 06:41 by 544594351
[考研] 数一英一271专硕（085401）求调剂，可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 一志愿上海理工能源动力（085800）310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考博] 26申博 +3 加油冲啊！ 2026-03-26 3/150 2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 0856调剂 +5 求求让我有书读� 2026-03-26 6/300 2026-03-27 15:12 by caszguilin
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭