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jianghyou

新虫 (初入文坛)

[求助] 我的罗非鱼肝细胞原代培养图正常吗? 求助1 已有1人参与

小弟最近在养罗非鱼的肝细胞,是个新手,一直养不好,也不知道是哪里出问题了,以下几张图片第一张是刚消化离心后的细胞悬液貌似有部分杂质,第二张图是2天后的,大家觉得那图正常吗?那很多的小亮点是什么啊?不知道是新长的细胞还是污染或者是气泡?这些小亮点在同样的空白培养基里没有,而且我用的几种不同培养基试了,细胞长的越好,小亮点越多,到底是什么啊?我的细胞培养两天后看的还可以,图2,图3,但是到第三天就基本全死了,是什么回事啊?是不是没换培养液,我本计划三天换的,悲剧啊?哪位好心人帮我看看,不甚感激!

培养过程:
罗非鱼酒精喷洒消毒2min,取肝脏后不含钙镁Hanks液(CMC)漂洗,尽量去除血液及结缔组织,手术剪将肝脏剪成1-2mm3小块,0.25%胰蛋白酶—EDTA消化1h左右(冷消化4℃过夜消化),过100um细胞筛2次,70um细胞筛2次过滤,10℃,70g,50g,30g离心,每次3min,测细胞活力,28℃,5%CO2培养。

培养基:L-15+5mM NaHCO3+100UI青链双抗+25ug/ml 氨苄青霉素+15mM HEPES+50ng/ml EGF,以前用过加血清的,效果也不好,也有不少文献没有加血清。

L-15培养基,消化离心后显微镜图片,200X



培养2天后,100X显微镜图片,小亮点是什么?



培养2天后,200X显微镜图片
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shijunyu0618

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
状态不是很好,不是很正常!
2楼2012-03-27 22:06:27
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芥末香

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

小亮点是非实质细胞,你应该用低速多次离心,就能很好的去除非实质细胞
吃得苦中苦,也不一定能开上路虎.
3楼2012-06-05 14:36:38
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花和尚鲁豫

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

师兄,我现在也在养罗非鱼原代肝细胞,也有很多问题求指教,求方法
4楼2013-03-04 11:59:55
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qinchao2099

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不正常。图中绝大多数细胞小,并呈椭圆形,应为血红细胞;只有少量细胞大而圆,并且内含大量脂肪滴,应为肝实质细胞,即hepatocytes。
5楼2014-08-27 11:29:21
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