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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 组织块贴壁法培养细胞如何做？
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雨玫天晴

新虫 (小有名气)

[求助] 组织块贴壁法培养细胞如何做？

各位各位这里瞧下下哈，我是个菜鸟级别的，问一下菜鸟问题哦～那个组织块贴壁培养细胞具体是个啥子过程嘞？细胞不纯的话，怎么消化怎么传代啊？谢谢各位咯*^_^*

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雨玫天晴

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严谨认真，做不一样的自己
1楼 2012-05-08 23:59:38
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雨玫天晴

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by chiscien at 2012-05-11 09:50:09:
这里是我所知道的细胞培养纯化的方法，希望能够帮助到你的，上皮细胞的话，是会不纯的，我们实验室的上皮细胞一般能够传到5代的样子。这里面有你需要的反复贴壁法的。你看看吧。
1、自然纯化
即利用某一种类细 ...

哇哦，这么齐全啊，太感谢了！我想我可以分别试试了 ！*^_^*

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严谨认真，做不一样的自己
8楼2012-05-12 06:57:35
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhaohq1209: 金币+3, BioEPI+1, telomerase: 金币+4, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-05-09 09:13 2012-05-09 10:02:03
很久以前做的，做法如下：
实验所要用的工具都应灭菌消毒。首先，在实验前24h于60×15mm的培养皿内铺上血清，将铺有血清的培养皿放入细胞培养箱内。。。。。。组织取出，用PBS将其冲洗干净。将组织切割成1mm3左右的小块。在剪切过程中，可以适当的向组织上滴1～2滴培养液，以保持湿润。然后，将剪切好的组织块用眼科镊均匀铺于事先准备好的培养皿内,加入少量含20％胎牛血清的DMEM培养液，以组织块不在培养液内漂浮为宜，然后把培养皿放置在37℃培养箱内。放置2～4h后待组织小块贴附于培养皿，加入含20％胎牛血清的DMEM培养液，在37℃含5%的CO2的条件下培养，待1～2天后细胞由组织中游出，摘掉组织块并用PBS清洗培养皿去除死细胞和组织残留物，加入培养液继续培养。待培养皿中的细胞长满后用胰蛋白酶将其消化下来，转入50ml的塑料培养瓶中培养，此时的细胞我们称其为原代。。。。细胞。

至于纯化，我做的是肺的，细胞相对含量不复杂，我要的细胞含量很高，所以穿几代，就纯化得差不多了。  要是肝的，那就不好做了。。。。。
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
2楼2012-05-09 09:13:08
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雨玫天晴

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
哦，先谢谢哈！可能我养的细胞比较复杂吧，我养的是上皮细胞，之前用消化法做了好多次，有细胞贴壁，但没有生长的迹象，所以想尝试下组织贴壁法培养。因为上皮细胞不能分离出纯的上皮组织，直接贴壁的话我担心杂细胞会太多，不知道我的考虑是否正确？#^_^#

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严谨认真，做不一样的自己
3楼2012-05-10 00:18:59
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xueaiw

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
组织块法养出的细胞确实比较杂，要想纯化，就得挑单克隆，上皮细胞确实长得比较慢
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4楼2012-05-10 13:22:43
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