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组织块贴壁法培养细胞如何做？
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各位各位这里瞧下下哈，我是个菜鸟级别的，问一下菜鸟问题哦～那个组织块贴壁培养细胞具体是个啥子过程嘞？细胞不纯的话，怎么消化怎么传代啊？谢谢各位咯*^_^* [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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8楼2012-05-12 06:57:35
【答案】应助回帖
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zhaohq1209: 金币+3, BioEPI+1, telomerase: 金币+4, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-05-09 09:13 2012-05-09 10:02:03
zhaohq1209: 金币+3, BioEPI+1, telomerase: 金币+4, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-05-09 09:13 2012-05-09 10:02:03
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很久以前做的，做法如下： 实验所要用的工具都应灭菌消毒。首先，在实验前24h于60×15mm的培养皿内铺上血清，将铺有血清的培养皿放入细胞培养箱内。。。。。。组织取出，用PBS将其冲洗干净。将组织切割成1mm3左右的小块。在剪切过程中，可以适当的向组织上滴1～2滴培养液，以保持湿润。然后，将剪切好的组织块用眼科镊均匀铺于事先准备好的培养皿内,加入少量含20％胎牛血清的DMEM培养液，以组织块不在培养液内漂浮为宜，然后把培养皿放置在37℃培养箱内。放置2～4h后待组织小块贴附于培养皿，加入含20％胎牛血清的DMEM培养液，在37℃含5%的CO2的条件下培养，待1～2天后细胞由组织中游出，摘掉组织块并用PBS清洗培养皿去除死细胞和组织残留物，加入培养液继续培养。待培养皿中的细胞长满后用胰蛋白酶将其消化下来，转入50ml的塑料培养瓶中培养，此时的细胞我们称其为原代。。。。细胞。 至于纯化，我做的是肺的，细胞相对含量不复杂，我要的细胞含量很高，所以穿几代，就纯化得差不多了。 要是肝的，那就不好做了。。。。。 |
2楼2012-05-09 09:13:08
3楼2012-05-10 00:18:59
4楼2012-05-10 13:22:43