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wunavy

木虫 (初入文坛)

[求助] 原代培养中的困惑

最近在做小鼠结肠成纤维细胞的原代培养,将组织(5-10cm)剪碎(1立方毫米左右)后,加0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA(1:1,4ml)于二氧化碳培养箱中消化(6次,每次10min),第一次10min组织就呈胶冻状,2-5次消化过程中这种胶冻状物一直存在,难以吸取上清,离心后细胞数目也不多。
请问怎么避免产生这种胶冻状物质?是不是胰酶量太少了?消化过程要不要搅拌?胰酶浓度?消化时间?
望指教!谢谢!!
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wendywan

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wunavy(金币+10): 谢谢 2011-09-13 21:37:28
adslye(金币+5): 鼓励新虫交流~鼓励好的建议! 2011-09-14 15:59:02
胰酶加多点,消化时间控制在15min之内,另外可以加一点DNA酶!
每天都应该做点有意义的事情!
2楼2011-09-13 16:52:12
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liwenmin

金虫 (小有名气)

★ ★
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利! 2011-09-14 15:59:20
我做元代培养的时候选择的胰酶浓度是0.125%,消化的时间比较长,在20min左右,我通常情况下不搅拌,直接放在培养箱中就可以了。
出现你这种情况通常是消化时间过短。但是我没你消化那么多次。
仅供参考。
3楼2011-09-14 14:42:10
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wl03

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liwenmin at 2011-09-14 14:42:10:
我做元代培养的时候选择的胰酶浓度是0.125%,消化的时间比较长,在20min左右,我通常情况下不搅拌,直接放在培养箱中就可以了。
出现你这种情况通常是消化时间过短。但是我没你消化那么多次。
仅供参考。

你好,请问你有做过肝脏原代细胞培养吗?
。。。
4楼2011-09-14 16:57:38
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liwenmin

金虫 (小有名气)

做过,但是次数不多。
5楼2011-09-15 08:42:17
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zmeng

铁虫 (初入文坛)

原代细胞建议用组织块贴壁培养法,我养的人滑膜还有瘢痕细胞都是用这种方法,效果不错,还有一种就是肉糜直接扔培养基,3天后细胞长出来就换液就可以,没必要用到胰酶消化那么麻烦。
6楼2011-09-15 15:11:46
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奥利弗33

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1479657楼: Originally posted by zmeng at 2011-09-15 15:11:46:
原代细胞建议用组织块贴壁培养法,我养的人滑膜还有瘢痕细胞都是用这种方法,效果不错,还有一种就是肉糜直接扔培养基,3天后细胞长出来就换液就可以,没必要用到胰酶消化那么麻烦。

请问您做组织块培养的时候 用将培养瓶倒置一段时间吗?如果倒置 那组织块能贴在顶上吗?如果不倒置 植入的组织块在培养液里会不会漂浮起来?本人是新手 很多还不太懂 麻烦您多多指教
7楼2012-03-23 16:18:55
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