24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1707  |  回复: 6

wunavy

木虫 (初入文坛)

[求助] 原代培养中的困惑

最近在做小鼠结肠成纤维细胞的原代培养,将组织(5-10cm)剪碎(1立方毫米左右)后,加0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA(1:1,4ml)于二氧化碳培养箱中消化(6次,每次10min),第一次10min组织就呈胶冻状,2-5次消化过程中这种胶冻状物一直存在,难以吸取上清,离心后细胞数目也不多。
请问怎么避免产生这种胶冻状物质?是不是胰酶量太少了?消化过程要不要搅拌?胰酶浓度?消化时间?
望指教!谢谢!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wendywan

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wunavy(金币+10): 谢谢 2011-09-13 21:37:28
adslye(金币+5): 鼓励新虫交流~鼓励好的建议! 2011-09-14 15:59:02
胰酶加多点,消化时间控制在15min之内,另外可以加一点DNA酶!
每天都应该做点有意义的事情!
2楼2011-09-13 16:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liwenmin

金虫 (小有名气)

★ ★
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利! 2011-09-14 15:59:20
我做元代培养的时候选择的胰酶浓度是0.125%,消化的时间比较长,在20min左右,我通常情况下不搅拌,直接放在培养箱中就可以了。
出现你这种情况通常是消化时间过短。但是我没你消化那么多次。
仅供参考。
3楼2011-09-14 14:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wl03

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liwenmin at 2011-09-14 14:42:10:
我做元代培养的时候选择的胰酶浓度是0.125%,消化的时间比较长,在20min左右,我通常情况下不搅拌,直接放在培养箱中就可以了。
出现你这种情况通常是消化时间过短。但是我没你消化那么多次。
仅供参考。

你好,请问你有做过肝脏原代细胞培养吗?
。。。
4楼2011-09-14 16:57:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liwenmin

金虫 (小有名气)

做过,但是次数不多。
5楼2011-09-15 08:42:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmeng

铁虫 (初入文坛)

原代细胞建议用组织块贴壁培养法,我养的人滑膜还有瘢痕细胞都是用这种方法,效果不错,还有一种就是肉糜直接扔培养基,3天后细胞长出来就换液就可以,没必要用到胰酶消化那么麻烦。
6楼2011-09-15 15:11:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奥利弗33

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1479657楼: Originally posted by zmeng at 2011-09-15 15:11:46:
原代细胞建议用组织块贴壁培养法,我养的人滑膜还有瘢痕细胞都是用这种方法,效果不错,还有一种就是肉糜直接扔培养基,3天后细胞长出来就换液就可以,没必要用到胰酶消化那么麻烦。

请问您做组织块培养的时候 用将培养瓶倒置一段时间吗?如果倒置 那组织块能贴在顶上吗?如果不倒置 植入的组织块在培养液里会不会漂浮起来?本人是新手 很多还不太懂 麻烦您多多指教
7楼2012-03-23 16:18:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wunavy 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +9 cs0106 2026-04-05 10/500 2026-04-06 17:58 by sherry_1901
[考研] 材料工程310专硕调剂 +14 捞捞我…. 2026-04-04 15/750 2026-04-06 14:18 by lqwchd
[考研] 338求调剂 +3 我想上岸ii 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:59 by nepu_uu
[考研] 调剂 +3 李广火 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:57 by 蓝云思雨
[考研] 304求调剂 +3 luoye0105 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:16 by 土木硕士招生
[考研] 312求调剂 +3 Say Never 2026-04-04 3/150 2026-04-05 11:19 by guoweigw
[考研] 一志愿江南大学085501机械工程专硕326分,本科佳木斯大学 +5 顾若浮生 2026-04-03 9/450 2026-04-05 09:57 by 1753564080
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
[考研] 考研调剂 +6 15615482637 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:43 by yu221
[考研] 调剂 +9 19945159693 2026-04-03 10/500 2026-04-04 20:16 by dongzh2009
[考研] 359求调剂 +7 hhhhaaaa$ 2026-04-04 7/350 2026-04-04 18:49 by imissbao
[考研] 工科341分调剂 +3 洛多罗 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:20 by 1753564080
[考研] 11408,284分,二战真诚求调剂 +4 12.27 2026-04-02 4/200 2026-04-03 14:14 by dxiaoxin
[考研] 一志愿陕西师范大学生物学317分 +5 1563日。 2026-04-02 5/250 2026-04-03 06:58 by ilovexiaobin
[考研] 材料340分调剂 +7 夏夜晚风_long 2026-04-02 9/450 2026-04-02 21:20 by dongzh2009
[考研] 285求调剂 +8 AZMK 2026-04-02 11/550 2026-04-02 20:16 by yulian1987
[考博] 材料工程专业硕士申博 +3 麟正宇 2026-03-30 3/150 2026-04-02 15:04 by greychen00
[考研] 材料工程322分 +8 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 8/400 2026-04-02 11:53 by 3041
[考研] 262求调剂 +9 励志一定发文章 2026-03-31 10/500 2026-04-01 12:22 by sunshine0013
信息提示
请填处理意见