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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原代培养中的困惑
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wunavy

木虫 (初入文坛)

[求助] 原代培养中的困惑

最近在做小鼠结肠成纤维细胞的原代培养，将组织（5-10cm）剪碎（1立方毫米左右）后，加0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA（1：1，4ml）于二氧化碳培养箱中消化（6次，每次10min），第一次10min组织就呈胶冻状，2-5次消化过程中这种胶冻状物一直存在，难以吸取上清，离心后细胞数目也不多。
请问怎么避免产生这种胶冻状物质？是不是胰酶量太少了？消化过程要不要搅拌？胰酶浓度？消化时间？
望指教！谢谢！！
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1楼2011-09-02 21:40:22
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wendywan

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wunavy(金币+10): 谢谢 2011-09-13 21:37:28
adslye(金币+5): 鼓励新虫交流~鼓励好的建议！ 2011-09-14 15:59:02
胰酶加多点，消化时间控制在15min之内，另外可以加一点DNA酶！
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每天都应该做点有意义的事情！
2楼2011-09-13 16:52:12
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liwenmin

金虫 (小有名气)
★ ★
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利！ 2011-09-14 15:59:20
我做元代培养的时候选择的胰酶浓度是0.125%，消化的时间比较长，在20min左右，我通常情况下不搅拌，直接放在培养箱中就可以了。
出现你这种情况通常是消化时间过短。但是我没你消化那么多次。
仅供参考。
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3楼2011-09-14 14:42:10
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wl03

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liwenmin at 2011-09-14 14:42:10:
我做元代培养的时候选择的胰酶浓度是0.125%，消化的时间比较长，在20min左右，我通常情况下不搅拌，直接放在培养箱中就可以了。
出现你这种情况通常是消化时间过短。但是我没你消化那么多次。
仅供参考。

你好，请问你有做过肝脏原代细胞培养吗？
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。。。
4楼2011-09-14 16:57:38
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liwenmin

金虫 (小有名气)
做过，但是次数不多。
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5楼2011-09-15 08:42:17
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zmeng

铁虫 (初入文坛)
原代细胞建议用组织块贴壁培养法，我养的人滑膜还有瘢痕细胞都是用这种方法，效果不错，还有一种就是肉糜直接扔培养基，3天后细胞长出来就换液就可以，没必要用到胰酶消化那么麻烦。
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6楼2011-09-15 15:11:46
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奥利弗33

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1479657楼: Originally posted by zmeng at 2011-09-15 15:11:46:
原代细胞建议用组织块贴壁培养法，我养的人滑膜还有瘢痕细胞都是用这种方法，效果不错，还有一种就是肉糜直接扔培养基，3天后细胞长出来就换液就可以，没必要用到胰酶消化那么麻烦。

请问您做组织块培养的时候 用将培养瓶倒置一段时间吗？如果倒置 那组织块能贴在顶上吗？如果不倒置 植入的组织块在培养液里会不会漂浮起来？本人是新手 很多还不太懂 麻烦您多多指教
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7楼2012-03-23 16:18:55
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