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wunavy

木虫 (初入文坛)

[求助] 原代培养中的困惑

最近在做小鼠结肠成纤维细胞的原代培养,将组织(5-10cm)剪碎(1立方毫米左右)后,加0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA(1:1,4ml)于二氧化碳培养箱中消化(6次,每次10min),第一次10min组织就呈胶冻状,2-5次消化过程中这种胶冻状物一直存在,难以吸取上清,离心后细胞数目也不多。
请问怎么避免产生这种胶冻状物质?是不是胰酶量太少了?消化过程要不要搅拌?胰酶浓度?消化时间?
望指教!谢谢!!
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wl03

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liwenmin at 2011-09-14 14:42:10:
我做元代培养的时候选择的胰酶浓度是0.125%,消化的时间比较长,在20min左右,我通常情况下不搅拌,直接放在培养箱中就可以了。
出现你这种情况通常是消化时间过短。但是我没你消化那么多次。
仅供参考。

你好,请问你有做过肝脏原代细胞培养吗?
。。。
4楼2011-09-14 16:57:38
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