24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4639  |  回复: 6

马龙sweeting

木虫 (正式写手)

[求助] 请问贴壁细胞用什么固定液固定、固定多长时间~~

请问贴壁细胞用什么固定液固定、固定多长时间~~我固定后是要进行染色检测凋亡和坏死~~查文献有在染完色再固定的,用的是甲醇和冰醋酸~~但不知道固定多长时间~~请高手指教~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangliguo007

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励分享和交流 2012-07-10 23:51:57
不明白你什么意思,检测凋亡的话一般用PI染色,然后流式细胞仪检测,具体步骤为:
1、收集细胞;
2、用PBS洗3次;
3、离心,去上清,之后加500ulPBS重选,之后加入10ml70%乙醇于-20℃固定过夜;
4、离心,去乙醇,加入PI(含RNase),4℃避光孵育30min,之后上机检测
物竞天择,适者生存。
2楼2012-07-10 21:20:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝天_1988

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币+2, 鼓励新虫发帖交流 2012-07-12 09:38:27
4%的多聚甲醛15min;甲醇好像是1h,记得不是很清楚。建议用多聚甲醛。
3楼2012-07-11 17:08:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zwzlysh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币+3, 鼓励新虫发帖交流 2012-07-12 09:38:37
建议用AO-EB双染色,细胞不需要固定,染出来的效果也非常好,凋亡细胞和正常细胞区别明显。
4楼2012-07-11 17:16:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongxie1982

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-08-07 20:38:57
lz应该是采用原位细胞凋亡检测细胞凋亡(TUNEL法)?按照promge公司试剂盒进行操作就可以,先爬片24h后,用含4%多聚甲醛的PBS在室温下固定25分钟,后用PBS洗5分钟(浸泡),重复2次。
5楼2012-07-13 16:03:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马龙sweeting

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yangliguo007 at 2012-07-10 21:20:29
不明白你什么意思,检测凋亡的话一般用PI染色,然后流式细胞仪检测,具体步骤为:
1、收集细胞;
2、用PBS洗3次;
3、离心,去上清,之后加500ulPBS重选,之后加入10ml70%乙醇于-20℃固定过夜;
4、离心,去乙醇 ...

请问您说的PBS洗3次是怎么洗~~是将细胞重悬后,10000r,离心5min,再收集沉淀,这样算一次洗涤~~还是就是加入PBS,在不是细胞飘起来的情况下,浸泡一下细胞团块儿呢~~
6楼2012-08-07 15:19:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cccssszzz08

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们这里测凋亡和坏死的时候一般都是双染法测的。PI和AnexinV
大概的步骤是
1、调整待检测细胞浓度为106个/ml,取200ul, 1000rpm×5min(4℃)。

2、预冷的PBS1ml 润洗两次2,1000rpm×5min(4℃)。

3、将细胞重悬于100ul binding buffer,加入2ulAnnexin-V-FITC(20ug/ml),轻轻混匀,避光冰上放置15分钟。

4、转至流式检测管,加入400ulPBS,每个样品临上机前加入1ulPI(50ug/ml),2分钟后迅速检测。

5、同时以不加Annexin V-FITC 及PI 的一管作为阴性对照。
这里说的PBS洗  就是直接在贴壁的情况下,然后就会传代的时候用PBS洗是一样的。
好好学习天天向上
7楼2012-08-07 22:20:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 马龙sweeting 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +13 呼呼?~+123456 2026-04-05 13/650 2026-04-05 22:07 by 醉翁wl
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:13 by 啵啵啵0119
[考研] 考研调剂生寻找导师 +3 顾瞻考研啊 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:18 by 啵啵啵0119
[考研] 385分 生物学(071000)求调剂 +11 qf626 2026-04-01 11/550 2026-04-05 17:35 by Ecowxq666!
[考研] 282求调剂 +3 aaa车辆 2026-04-01 3/150 2026-04-05 17:03 by yulian1987
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 20:49 by 蓝云思雨
[考研] 化学308分调剂 +23 你好明天你好 2026-03-30 24/1200 2026-04-04 18:29 by macy2011
[考研] 求调剂:085600材料与化工,考材科基,总分319 +21 678lucky 2026-03-31 26/1300 2026-04-04 16:22 by dongzh2009
[考研] 怎么删帖子啊 +3 缝曦1000 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:20 by 土木硕士招生
[考研] 268求调剂 +8 你好tg 2026-04-03 9/450 2026-04-04 05:08 by gswylq
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 293求调剂 +5 末未mm 2026-04-02 6/300 2026-04-03 15:20 by 王保杰33
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 303求调剂 +3 一色清羽 2026-04-02 4/200 2026-04-03 10:22 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿深大085601材料工程专业(专硕)300分可以调剂去哪 +8 10160315 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:36 by hypershenger
[考研] 求调剂 302分初试 0854 +5 伶可乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 17:53 by 笔落锦州
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 09:52 by yulian1987
[硕博家园] 考研调剂 +5 骆驼男人 2026-04-01 5/250 2026-04-01 14:28 by syjjj0321
[考研] 一志愿西交大080500材料学硕349 +6 jqx1258 2026-03-31 7/350 2026-03-31 21:08 by yuq
[考研] 一志愿大连理工大学材料求调剂 +6 Gymno 2026-03-30 6/300 2026-03-31 07:26 by 无际的草原
信息提示
请填处理意见