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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】免疫组化
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liulubing

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】免疫组化 已有8人参与

我要做大鼠脑组织免疫组化的相关蛋白表达，方法是用免疫组化法，不知道组织处理需要注意些什么。可以固定多长时间？因为我的实验时磊样本的，所以就需要固定时间很长，且不一，会不会影响免疫组化结果呀？
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1楼 2010-09-07 23:26:33
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jxx0311

金虫 (小有名气)
★ ★
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karl2100(金币+1):多谢指教！ 2010-09-09 00:02:40
一般固定液与检材体积比为 1∶ 10 左右为宜, 器官组织完全浸泡于固定液中, 固定时间 3～ 7 d。全脑应线绳悬吊固定，如果固定的器官较大、 容器较小或固定液较少时, 应于固定 3 d 内, 翻动器官或更换固定液, 以免大器官贴壁面压平和固定不良。
固定液过浓或过稀释, 渗透组织的能力就差, 组织固定不均匀, 出现中央区组织固定不良。
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失去也许意味着换一种方式拥有。
2楼2010-09-08 08:42:26
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Elffeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果担心外固定不全，还可以联合内固定
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Elffeng
3楼2010-09-08 09:37:37
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mafang68

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
组化所需组织应新鲜，离体后尽快固定。固定时间至少24小时，时间长了3月半年的也没问题
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木虫啦，哈哈
4楼2010-09-08 10:31:29
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liulubing

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-09-08 10:31:29:
组化所需组织应新鲜，离体后尽快固定。固定时间至少24小时，时间长了3月半年的也没问题

谢谢你的知道，想问一下我做的是大鼠脑内bcl-2,bax,caspase-3,HSP-70,蛋白的表达，不知道一抗和二抗怎么选？应该要多克隆抗体吧？哪个厂家的好些？国产和进口的都做得出来吗？
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5楼2010-09-08 21:27:16
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liulubing

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by Elffeng at 2010-09-08 09:37:37:
如果担心外固定不全，还可以联合内固定

谢谢你的回复！
   本来是需要心脏灌流在固定一次的，但是不知道不固定会不会影响很大呢？我做的是脑缺血再灌注大鼠模型，主要测些细胞凋亡的指标，工作量太大了，眼看要毕业还没有学懂免疫组化，急得很啊！
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6楼2010-09-08 21:29:21
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21102110

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用多聚甲醛心脏灌流，次日更换固定液，此后每周更换即可
这几个的一抗santa cruz的即可，二抗，你若有钱的话就用jackson or invitrogen的Alexa系列，没钱就买碧云天的也行
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7楼2010-09-08 21:41:56
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burkut65
karl2100:请勿回复纯表情帖，谢谢！ 2010-09-09 00:03:00
8楼2010-09-08 21:46:05
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liulubing

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 21102110 at 2010-09-08 21:41:56:
用多聚甲醛心脏灌流，次日更换固定液，此后每周更换即可
这几个的一抗santa cruz的即可，二抗，你若有钱的话就用jackson or invitrogen的Alexa系列，没钱就买碧云天的也行

请问国产的一抗都做不出来吗？比如北京博奥森、武汉博士德等？还有原位细胞凋亡检测试剂盒（TUNEL）碧云天的可以吗？我本想在实验开始前做做预实验，但是看进口的都很贵呀，不知道可不可以将组织制成蜡块后再买来试剂做预示可以不？
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9楼2010-09-08 22:38:30
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21102110

铁杆木虫 (小有名气)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
国产的一抗，我也试过几个，基本上好用的不多，除了内参GAPDH，tubulin是国产的外，其余我都是用进口的。再说santa cruz的抗体价格也还可以，也就1800左右，跟国产的差不多。
TUNEL 碧云天，我们实验室有人在用，还可以，至于蜡块，其实可以存放很久。
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10楼2010-09-09 21:09:30
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