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liulubing

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】免疫组化 已有8人参与

我要做大鼠脑组织免疫组化的相关蛋白表达,方法是用免疫组化法,不知道组织处理需要注意些什么。可以固定多长时间?因为我的实验时磊样本的,所以就需要固定时间很长,且不一,会不会影响免疫组化结果呀?
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银虫 (初入文坛)

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Originally posted by mafang68 at 2010-09-08 10:31:29:
组化所需组织应新鲜,离体后尽快固定。固定时间至少24小时,时间长了3月半年的也没问题

谢谢你的知道,想问一下我做的是大鼠脑内bcl-2,bax,caspase-3,HSP-70,蛋白的表达,不知道一抗和二抗怎么选?应该要多克隆抗体吧?哪个厂家的好些?国产和进口的都做得出来吗?
5楼2010-09-08 21:27:16
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银虫 (初入文坛)

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Originally posted by Elffeng at 2010-09-08 09:37:37:
如果担心外固定不全,还可以联合内固定

谢谢你的回复!
   本来是需要心脏灌流在固定一次的,但是不知道不固定会不会影响很大呢?我做的是脑缺血再灌注大鼠模型,主要测些细胞凋亡的指标,工作量太大了,眼看要毕业还没有学懂免疫组化,急得很啊!
6楼2010-09-08 21:29:21
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银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 21102110 at 2010-09-08 21:41:56:
用多聚甲醛心脏灌流,次日更换固定液,此后每周更换即可
这几个的一抗santa cruz的即可,二抗,你若有钱的话就用jackson or invitrogen的Alexa系列,没钱就买碧云天的也行

请问国产的一抗都做不出来吗?比如北京博奥森、武汉博士德等?还有原位细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL)碧云天的可以吗?我本想在实验开始前做做预实验,但是看进口的都很贵呀,不知道可不可以将组织制成蜡块后再买来试剂做预示可以不?
9楼2010-09-08 22:38:30
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银虫 (初入文坛)

[quote]Originally posted by 21102110 at 2010-09-09 21:09:30:
国产的一抗,我也试过几个,基本上好用的不多,除了内参GAPDH,tubulin是国产的外,其余我都是用进口的。再说santa cruz的抗体价格也还可以,也就1800左右,跟国产的差不多。
TUNEL 碧云天,我们实验室有人在用, ... [/qu
   
谢谢你!你们试验是有人在做TUNEL?可以给我一份你们的实验方案吗?具体一点儿的,我实在是没做过,现在在只知道些原理,麻烦你发到我邮箱,lulubing1220@yahoo.com.cn   万分感谢!!!!
11楼2010-09-10 21:40:08
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银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by liulubing at 2010-09-10 21:40:08:
[quote]Originally posted by 21102110 at 2010-09-09 21:09:30:
国产的一抗,我也试过几个,基本上好用的不多,除了内参GAPDH,tubulin是国产的外,其余我都是用进口的。再说santa cruz的抗体价格也还可 ...

邮箱弄错了,是liulubing1220@yahoo.com.cn    谢谢!谢谢!
12楼2010-09-10 21:41:27
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