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马龙sweeting

木虫 (正式写手)

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[求助] 请问贴壁细胞用什么固定液固定、固定多长时间~~

请问贴壁细胞用什么固定液固定、固定多长时间~~我固定后是要进行染色检测凋亡和坏死~~查文献有在染完色再固定的，用的是甲醇和冰醋酸~~但不知道固定多长时间~~请高手指教~~

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1楼 2012-07-10 11:50:44

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cccssszzz08

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

我们这里测凋亡和坏死的时候一般都是双染法测的。PI和AnexinV
大概的步骤是
1、调整待检测细胞浓度为106个/ml，取200ul， 1000rpm×5min(4℃)。

2、预冷的PBS1ml 润洗两次2，1000rpm×5min(4℃)。

3、将细胞重悬于100ul binding buffer，加入2ulAnnexin-V-FITC(20ug/ml)，轻轻混匀，避光冰上放置15分钟。

4、转至流式检测管，加入400ulPBS，每个样品临上机前加入1ulPI（50ug/ml），2分钟后迅速检测。

5、同时以不加Annexin V-FITC 及PI 的一管作为阴性对照。
这里说的PBS洗就是直接在贴壁的情况下，然后就会传代的时候用PBS洗是一样的。