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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何提高细胞原代培养细胞的产量？
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梁顺涛

金虫 (小有名气)

[交流] 如何提高细胞原代培养细胞的产量？

各位师兄师姐，我最近在做小鼠骨髓来源的巨噬细胞的体外分化，用含M-csf的DMEM(10%FBS)的培养基培养小鼠骨髓细胞，中间3天后换次液，7天后收集，但是每次收集的细胞数都不多，5只老鼠，最后也就手机6——7*10^6个/ML，请问该怎么处理才能提升细胞产量啊？
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1楼2014-01-17 14:29:23
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a070274011

新虫 (初入文坛)
★ ★
梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2014-01-26 20:29:25
原代培养最怕染菌，首先一定要做到无菌条件，取下的组织要依次经过酒精，含双抗缓冲液（PBS或D-HANKS），不含双抗缓冲液，漂洗数次。再者就是在剪碎组织时应该是越碎越好，一般要剪20-30分钟。最后就是培养液的PH一定要在所培养的细胞所需的范围内，原代一般加入20的血清（胎牛血清要好于小牛血清）。牛血清可以在中国实验室耗材网biolabware.cn购买
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2楼2014-01-17 14:59:16
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wolfman840

木虫 (正式写手)
★ ★
梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2014-01-26 20:29:33
换液用的离心方法还是自然沉降？牛血清质量也很关键的。不一定大牌子的就好，得看你实际用下来的结果。一般15~20%牛血清。
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3楼2014-01-17 15:08:06
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梁顺涛

金虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-01-26 20:29:43
引用回帖:
2楼: Originally posted by a070274011 at 2014-01-17 14:59:16
原代培养最怕染菌，首先一定要做到无菌条件，取下的组织要依次经过酒精，含双抗缓冲液（PBS或D-HANKS），不含双抗缓冲液，漂洗数次。再者就是在剪碎组织时应该是越碎越好，一般要剪20-30分钟。最后就是培养液的PH一 ...

放酒精里可以理解，但是用含双抗的缓冲液冲洗就没有必要了吧？双抗是通过阻断细菌增值而起作用的，用它漂洗短时间内是不是起不到抑菌的作用？要剪碎的组织能有多大？会用20到30分钟吗？这么长的时间细胞会不会死亡啊？
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5楼2014-01-18 11:36:21
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梁顺涛

金虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2014-01-26 20:29:49
引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-17 15:08:06
换液用的离心方法还是自然沉降？牛血清质量也很关键的。不一定大牌子的就好，得看你实际用下来的结果。一般15~20%牛血清。

谢谢啊!我在大皿里培养，换液时直接将原培养基弃掉，滴管吸PBS沿大皿内壁缓慢加入，然后“十”字形晃动培养皿弃掉PBS，重复2到3次，然后加上新的培养基，方法和加PBS一样。血清是进口FBS的，我用的浓度是10%。
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6楼2014-01-18 11:41:55
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wolfman840

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 梁顺涛 at 2014-01-18 11:41:55
谢谢啊!我在大皿里培养，换液时直接将原培养基弃掉，滴管吸PBS沿大皿内壁缓慢加入，然后“十”字形晃动培养皿弃掉PBS，重复2到3次，然后加上新的培养基，方法和加PBS一样。血清是进口FBS的，我用的浓度是10%。...

血清加到15%试试，换液时候要留一点时间让细胞沉一下，别晃完就倒了。
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7楼2014-01-24 16:03:33
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梁顺涛

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-24 16:03:33
血清加到15%试试，换液时候要留一点时间让细胞沉一下，别晃完就倒了。...

嗯 ，好的 ，来年试试。
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8楼2014-01-25 21:28:57
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treetreew

木虫 (小有名气)
★
梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
冲出来的？

好像差不多就这么多细胞，不算少了
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9楼2014-01-26 10:08:39
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梁顺涛

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by treetreew at 2014-01-26 10:08:39
冲出来的？

好像差不多就这么多细胞，不算少了

不多啊，老师说她以前做的时候，4只小鼠就能收获1-2*10^7个。
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10楼2014-01-27 00:28:16
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treetreew

木虫 (小有名气)
我记得我冲出来是10的5次方数量级，一只老鼠，比你少多了
细胞够做实验就好，多了不见得是好事儿
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11楼2014-01-27 07:23:05
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梁顺涛

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by treetreew at 2014-01-27 07:23:05
我记得我冲出来是10的5次方数量级，一只老鼠，比你少多了
细胞够做实验就好，多了不见得是好事儿

我的是不够用，我的实验条件比较多，一次得用96孔板，每孔10的5次方个
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12楼2014-01-27 20:25:57
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梁顺涛

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by treetreew at 2014-01-27 07:23:05
我记得我冲出来是10的5次方数量级，一只老鼠，比你少多了
细胞够做实验就好，多了不见得是好事儿

你的肯定冲出来的少
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13楼2014-01-27 20:26:43
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我肚子好饿

禁虫 (初入文坛)
★
梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
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14楼2018-10-29 20:25:13
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yingying15884楼
2014-01-17 21:27   回复  
梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
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