应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原代细胞的分离与纯化培养
181/2返回列表12下一页
查看: 2463  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dabizi_911

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】原代细胞的分离与纯化培养

咱们原代细胞从动物体中分离，有没有什么技巧呢，分离后纯化单一的细胞有什么好的技巧没，希望大伙多多说一下自己的观点，我以后也是做细胞的。谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-18 01:01:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sandra2128

金虫 (小有名气)
★ ★
dabizi_911(金币+1):谢谢参与
看天(金币+1):鼓励一下 2010-08-20 22:53:32
1、无菌操作很重要。我平时是去下载组织后用75%酒精浸泡2-3min，然后用生理盐水洗15遍以上。
2、工具很重要。俗话说磨刀不误砍柴工，有好的工具在手，剥离或者切割就不会浪费很长时间，保证了整个分离过程的时长不会对细胞活性造成影响。
3、media很重要。事先把media准备好，分离出来后及时加上media，保证细胞活性。记得加pen/strep。原代时可适量加倍。
4、按时换液。原代及时换液可以防止污染。
暂时就能总结这么多了。以后想起来再补充吧
赞一下(3人) 回复此楼
静而后能安；安而后能思；思而后能得。
2楼2010-08-18 02:43:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

mafang68

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
dabizi_911(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2):新虫，鼓励交流~~ 2010-08-22 09:09:58
1 提取时速度要快，提前把材料准备好，想周全，做实验时拿来就用，不要现找
2 保证无菌，分离时可加双抗；PBS里还可以加上血清，保证细胞状态好
3 分离后的细胞要纯化，可通过不同群的细胞是否贴壁等简单纯化；要想纯度高，可用磁珠分选，不过价格高
4 一些细胞要保持活性需在培养时加入细胞因子。我分离的淋巴细胞就需要IL-2；树突状细胞则需加GM-CSF和IL-4
知道的就这么些了
赞一下(2人) 回复此楼
木虫啦，哈哈
3楼2010-08-18 08:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜龙舞

金虫 (小有名气)
★
dabizi_911(金币+1):谢谢参与
原代细胞培养是组织消化后细胞量非常巨大，一般要计数后再放进方瓶内培养，但是都嫌麻烦不怎么做，这是要取舍，舍弃一定量的单细胞悬液，而且原代细胞要传几代稳定了再做实验。只要严格细胞操作技术规范，一般没有问题。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-08-18 09:01:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
dabizi_911(金币+1):谢谢参与
原代不好活，培养条件要摸索

有些组织容易污染，需要稀释后找单克隆
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-08-18 09:09:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
dabizi_911(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+3):鼓励交流，欢迎常来~~ 2010-08-22 09:10:41
1、预先高压消毒所需要的器材
2、取完新鲜组织后要用冰冷充分洗涤洗掉杂细胞，分离也要尽量挑除血管等。不过也不要搞太久，否则分出来的细胞活力很差
3、胶原酶比胰酶更适合消化组织，消化时间和强度就要自己摸索
4、建议在胶原酶快消化结束之前加DNase I，这样细胞会更加分散，过筛子的时候更好过，分出来的细胞量更大
5、种板两天之内不要去碰他，加1.5~2倍双抗养着。两天后第一次换液的时候小心点，慢慢摇晃摇掉杂细胞。后续的换液也同样操作，视情况可以冲洗，
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-08-18 09:31:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dabizi_911

金虫 (著名写手)
有人做过肠上皮细胞的原代细胞的分离与纯化没
赞一下 回复此楼
7楼2010-08-18 19:59:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mafang68

金虫 (著名写手)
dabizi_911(金币+1): 2010-08-21 00:42:13
引用回帖:
Originally posted by dabizi_911 at 2010-08-18 19:59:57:
有人做过肠上皮细胞的原代细胞的分离与纯化没

我做过小鼠的上皮淋巴细胞的分离
赞一下 回复此楼
木虫啦，哈哈
8楼2010-08-20 22:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dabizi_911

金虫 (著名写手)

能提供些支持吗

引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-08-20 22:41:44:



我做过小鼠的上皮淋巴细胞的分离

我需要的分离肠上皮细胞，你能把你的上皮淋巴细胞的分离方法交流一下吗，或者有什么好的参考书你那有的话，可以发一份给我吗？
chenhq@ihep.ac.cn
谢谢
赞一下 回复此楼
9楼2010-08-21 00:44:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alxz

铁杆木虫 (职业作家)

其实我是一只大老鼠
★
dabizi_911(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by dabizi_911 at 2010-08-18 01:01:12:
咱们原代细胞从动物体中分离，有没有什么技巧呢，分离后纯化单一的细胞有什么好的技巧没，希望大伙多多说一下自己的观点，我以后也是做细胞的。谢谢

进来学习……
回复此楼
风起，夜未央~流年，乱浮生
10楼2010-08-21 01:22:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dabizi_911 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 290求调剂 +5 材料专硕调剂； 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:40 by gaoxiaoniuma
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 7/350 2026-02-28 20:42 by 好好好1233
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[考研] 272求调剂 +3 田智友 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:31 by 王加浩to
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭