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dabizi_911

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】原代细胞的分离与纯化培养

咱们原代细胞从动物体中分离,有没有什么技巧呢,分离后纯化单一的细胞有什么好的技巧没,希望大伙多多说一下自己的观点,我以后也是做细胞的。谢谢
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mafang68

金虫 (著名写手)

dabizi_911(金币+1): 2010-08-21 00:42:13
引用回帖:
Originally posted by dabizi_911 at 2010-08-18 19:59:57:
有人做过肠上皮细胞的原代细胞的分离与纯化没

我做过小鼠的上皮淋巴细胞的分离
木虫啦,哈哈
8楼2010-08-20 22:41:44
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sandra2128

金虫 (小有名气)

★ ★
dabizi_911(金币+1):谢谢参与
看天(金币+1):鼓励一下 2010-08-20 22:53:32
1、无菌操作很重要。我平时是去下载组织后用75%酒精浸泡2-3min,然后用生理盐水洗15遍以上。
2、工具很重要。俗话说磨刀不误砍柴工,有好的工具在手,剥离或者切割就不会浪费很长时间,保证了整个分离过程的时长不会对细胞活性造成影响。
3、media很重要。事先把media准备好,分离出来后及时加上media,保证细胞活性。记得加pen/strep。原代时可适量加倍。
4、按时换液。原代及时换液可以防止污染。
暂时就能总结这么多了。以后想起来再补充吧
静而后能安;安而后能思;思而后能得。
2楼2010-08-18 02:43:33
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mafang68

金虫 (著名写手)

★ ★ ★
dabizi_911(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2):新虫,鼓励交流~~ 2010-08-22 09:09:58
1 提取时速度要快,提前把材料准备好,想周全,做实验时拿来就用,不要现找
2 保证无菌,分离时可加双抗;PBS里还可以加上血清,保证细胞状态好
3 分离后的细胞要纯化,可通过不同群的细胞是否贴壁等简单纯化;要想纯度高,可用磁珠分选,不过价格高
4 一些细胞要保持活性需在培养时加入细胞因子。我分离的淋巴细胞就需要IL-2;树突状细胞则需加GM-CSF和IL-4
知道的就这么些了
木虫啦,哈哈
3楼2010-08-18 08:51:31
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夜龙舞

金虫 (小有名气)


dabizi_911(金币+1):谢谢参与
原代细胞培养是组织消化后细胞量非常巨大,一般要计数后再放进方瓶内培养,但是都嫌麻烦不怎么做,这是要取舍,舍弃一定量的单细胞悬液,而且原代细胞要传几代稳定了再做实验。只要严格细胞操作技术规范,一般没有问题。
4楼2010-08-18 09:01:00
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