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梁顺涛

金虫 (小有名气)


[交流] 如何提高细胞原代培养细胞的产量?

各位师兄师姐,我最近在做小鼠骨髓来源的巨噬细胞的体外分化,用含M-csf的DMEM(10%FBS)的培养基培养小鼠骨髓细胞,中间3天后换次液,7天后收集,但是每次收集的细胞数都不多,5只老鼠,最后也就手机6——7*10^6个/ML,请问该怎么处理才能提升细胞产量啊?
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梁顺涛

金虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-24 16:03:33
血清加到15%试试,换液时候要留一点时间让细胞沉一下,别晃完就倒了。...

嗯 ,好的 ,来年试试。
8楼2014-01-25 21:28:57
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a070274011

新虫 (初入文坛)


★ ★
梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2014-01-26 20:29:25
原代培养最怕染菌,首先一定要做到无菌条件,取下的组织要依次经过酒精,含双抗缓冲液(PBS或D-HANKS),不含双抗缓冲液,漂洗数次。再者就是在剪碎组织时应该是越碎越好,一般要剪20-30分钟。最后就是培养液的PH一定要在所培养的细胞所需的范围内,原代一般加入20的血清(胎牛血清要好于小牛血清)。牛血清可以在中国实验室耗材网biolabware.cn购买
2楼2014-01-17 14:59:16
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wolfman840

木虫 (正式写手)


★ ★
梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2014-01-26 20:29:33
换液用的离心方法还是自然沉降?牛血清质量也很关键的。不一定大牌子的就好,得看你实际用下来的结果。一般15~20%牛血清。
3楼2014-01-17 15:08:06
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梁顺涛

金虫 (小有名气)



137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-01-26 20:29:43
引用回帖:
2楼: Originally posted by a070274011 at 2014-01-17 14:59:16
原代培养最怕染菌,首先一定要做到无菌条件,取下的组织要依次经过酒精,含双抗缓冲液(PBS或D-HANKS),不含双抗缓冲液,漂洗数次。再者就是在剪碎组织时应该是越碎越好,一般要剪20-30分钟。最后就是培养液的PH一 ...

放酒精里可以理解,但是用含双抗的缓冲液冲洗就没有必要了吧?双抗是通过阻断细菌增值而起作用的,用它漂洗短时间内是不是起不到抑菌的作用?要剪碎的组织能有多大?会用20到30分钟吗?这么长的时间细胞会不会死亡啊?
5楼2014-01-18 11:36:21
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