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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 软体动物细胞原代培养，增殖缓慢问题
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许三多

木虫 (著名写手)

[求助] 软体动物细胞原代培养，增殖缓慢问题

本人半路出家做杂色鲍细胞培养。经过几次尝试，终于有一批细胞培养成功，至今已5周。起初一周，细胞贴壁，多呈上皮状，有增殖痕迹。但是后来的几周几乎没有增殖，我甚是着急，前来求助

Medium: per 100ml
                      DMEM(low glucose)                     68ml
                      fetal bovine serum                       20ml
                      double-resistance                        1ml
                      10% NaCl                                   10ml
                       7.5% NaHCO3                          1ml(pH=7.2）
                      25cm2 培养瓶
一周换液一次
我没有专用的培养箱，于是就在空调房里，约25度培养的。

求助，求助，真心求助

[ Last edited by 许三多 on 2012-10-12 at 11:10 ]
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1楼 2012-10-12 10:59:07
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匿名

用户注销 (知名作家)
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 应助指数-1, 违规存档, 非应助 2012-10-13 08:00:33
本帖仅楼主可见
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2楼2012-10-12 11:35:23
已阅   申请BioEPI   编辑   查看我的主页

许三多

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shangyukuan at 2012-10-12 11:35:23
弱弱的问一句:这个“杂色鲍细胞”是个什么东东？

杂色鲍，软体动物，鲍的一种。我在做杂色鲍的细胞培养，原代细胞有贴壁，上皮状，但是增殖很慢很慢。你知道怎么办吗？
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3楼2012-10-12 13:13:14
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匿名

用户注销 (知名作家)
★ ★ ★
许三多: 金币+2 2012-10-12 13:54:54
看天: 金币+1, 鼓励一下 2012-10-12 14:20:56
本帖仅楼主可见
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4楼2012-10-12 13:35:00
已阅   申请BioEPI   编辑   查看我的主页

许三多

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shangyukuan at 2012-10-12 13:35:00
抱歉呀我无能为力！是不是缺少生长因子什么的呀？增加接种量会不会好点，如果接种后细胞浓度太小了细胞不长...

除了胎牛血清，我没有家别的生长因子。接种的密度是，每瓶20块左右，一块1mm见方。
不过，你这一说，真提醒我了，我下次再做，就多接种点儿试试。
谢谢啦
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5楼2012-10-12 13:54:09
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许三多

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shangyukuan at 2012-10-12 13:35:00
抱歉呀我无能为力！是不是缺少生长因子什么的呀？增加接种量会不会好点，如果接种后细胞浓度太小了细胞不长...

还有一点儿，我想跟你说说。整个培养瓶中，有的地方细胞近乎长满了，有的地方则是几个细胞零星分布，甚至没有细胞。组织块周围都有细胞迁移痕迹，但就是不不再增殖。
跟培养液会不会有关系呢？
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6楼2012-10-12 14:02:49
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zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
许三多: 金币+2 2012-10-12 18:45:48
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-10-12 20:43:56
根据你说的情况 我想是不是你该转移下你的培养细胞了 把聚集在一起的吹打开
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人物
7楼2012-10-12 14:25:47
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许三多

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zr281069 at 2012-10-12 14:25:47
根据你说的情况 我想是不是你该转移下你的培养细胞了 把聚集在一起的吹打开

这个我没有想过呢。那，会不会把细胞弄得不贴壁了呢？杂色鲍的细胞很小的，10um左右。
还有，这个转移具体怎么做呢？是在原来的瓶里吹打开吗？
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8楼2012-10-12 18:18:30
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zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
许三多: 金币+2 2012-10-12 21:18:50
引用回帖:
8楼: Originally posted by 许三多 at 2012-10-12 18:18:30
这个我没有想过呢。那，会不会把细胞弄得不贴壁了呢？杂色鲍的细胞很小的，10um左右。
还有，这个转移具体怎么做呢？是在原来的瓶里吹打开吗？...

嗯 我上次听一个师姐说过 就相当于转移培养 吸取培养基 消化酶处理 加培养基 吸取到另一个培养基 再吹打  她也在摸索中 仅供参考
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人物
9楼2012-10-12 19:51:24
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许三多

木虫 (著名写手)
★
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2012-10-13 08:01:59
引用回帖:
9楼: Originally posted by zr281069 at 2012-10-12 19:51:24
嗯 我上次听一个师姐说过 就相当于转移培养 吸取培养基 消化酶处理 加培养基 吸取到另一个培养基 再吹打  她也在摸索中 仅供参考...

哦，这个跟传代很像啊。这个细胞很小，加之数量不是很多，我很担心胰酶消化下就没了。
如果你师姐有进展了，继续交流哈
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10楼2012-10-12 21:18:29
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