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Luse_91

新虫 (著名写手)

[求助] 为什么我冻存的细胞复苏出来活的细胞很少? 已有1人参与

如题,我的冻存液是培养基:FBS:DMSO=7:2:1,而且陪玩也放回四度冷却了,冻存盒用之前也平衡到室温了,但是复苏出来之后,细胞活着的还是只有几个。我就不明白了这是怎么回事?各位大神能否帮我解惑?谢谢~~
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尘香驻风

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Luse_91: 金币+20, 有帮助 2014-09-02 15:27:38
1.我通常用的冻存液都是FBS:DMSO=9:1,这样虽然比较费血清,但冻存效果很好。你换这个冻存液试试,看看是不是冻存液不好。
2.冻存的密度也有影响,也许你可以试试冻大一点的密度。
2楼2014-09-02 13:41:46
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Luse_91

新虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 尘香驻风 at 2014-09-02 13:41:46
1.我通常用的冻存液都是FBS:DMSO=9:1,这样虽然比较费血清,但冻存效果很好。你换这个冻存液试试,看看是不是冻存液不好。
2.冻存的密度也有影响,也许你可以试试冻大一点的密度。

我细胞冻存得很多,就是复苏出来活着的不多,我冻存的跟他们的都是一样的做法,我就不明白,别人的细胞复苏出来很好啊,就我的有问题。
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3楼2014-09-02 14:47:35
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尘香驻风

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-09-02 14:47:35
我细胞冻存得很多,就是复苏出来活着的不多,我冻存的跟他们的都是一样的做法,我就不明白,别人的细胞复苏出来很好啊,就我的有问题。...

会不会是你的细胞本身状态不好?
4楼2014-09-02 15:21:19
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Luse_91

新虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 尘香驻风 at 2014-09-02 15:21:19
会不会是你的细胞本身状态不好?...

我冻过两种细胞都是这样子,复苏出来都是只有一点点活着的细胞,好纠结的说这个问题。。我觉得细胞状态挺好的,可能就是稍微有点密吧,快到90%。
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5楼2014-09-02 15:27:13
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尘香驻风

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-09-02 15:27:13
我冻过两种细胞都是这样子,复苏出来都是只有一点点活着的细胞,好纠结的说这个问题。。我觉得细胞状态挺好的,可能就是稍微有点密吧,快到90%。...

=。=好吧。但90%我觉得还好,我经常都是差不多这个密度的时候才冻的。。。
6楼2014-09-02 16:13:13
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Luse_91

新虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 尘香驻风 at 2014-09-02 16:13:13
=。=好吧。但90%我觉得还好,我经常都是差不多这个密度的时候才冻的。。。...

哦,养细胞感觉好苦逼,经验+rp啊,缺一不可!!还是癌细胞好养,随便养。
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
7楼2014-09-02 16:45:30
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尘香驻风

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-09-02 16:45:30
哦,养细胞感觉好苦逼,经验+rp啊,缺一不可!!还是癌细胞好养,随便养。...

是啊,我刚开始养的时候也是各种问题。。
8楼2014-09-02 16:47:38
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Luse_91

新虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 尘香驻风 at 2014-09-02 16:47:38
是啊,我刚开始养的时候也是各种问题。。...

纠结死了,细胞养到中间才加双抗,会不会对细胞造成呀?我最近在养bEnd.3细胞,一开始没加双抗,后面加了,然后细胞完全变形了。我不知道是不是这个原因,前面状态都很好的,后面细胞都没有原来的形态了,变成那种亮亮的,偏圆形的细胞了。
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9楼2014-09-02 17:23:36
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思行1993

金虫 (初入文坛)

复苏方法是怎样的?你是冻存液直接补液培养第二天换液,还是离心再培养,一般我选择前者,效果还不错啊,你复苏的时候是在冰点时间留长了?
三思而后行
10楼2014-09-03 00:28:49
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