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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » RAW264.7细胞复苏总是失败
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笑语盈盈

金虫 (小有名气)

[交流] RAW264.7细胞复苏总是失败已有5人参与

三周前其他实验室同学馈赠一株RAW264.7,是在培养瓶拿过来了，养了两周都很好，但是再复苏细胞时却总是无法成功复苏，复苏时先离心再培养的，开始状态很正常，三个小时后百分之七十贴壁，百分之一的长角（此时换一次培养液）；六小时后有百分之十的长角，第二天就全部长角了。。。求大神指点！（复苏了三次都是这样）
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1楼2014-03-28 21:00:31
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已支

新虫 (小有名气)
★
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1.确定细胞冻存前状态很好，冻存接种数量尽量多一点！2.复苏前先准备好离心管，1毫升冻存细胞放6-8毫升培养基，尽可能大量稀释！3.从液氮罐里拿出细胞后，立即在37度水浴溶，待有绿豆大的冰块时为宜！4.将冻存细胞稀释轻轻吹打均匀，一般我离心3分钟1000转！5.离心完吹打一定要轻，机械损伤对细胞伤害很大！6.隔天观察细胞状态，最好换一次液！！如果你这些做的都差不多，应该是之前细胞接种时的问题吧~机械损伤比胰酶消化危害还大~
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2楼2014-03-29 17:35:35
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笑语盈盈

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 已支 at 2014-03-29 17:35:35
1.确定细胞冻存前状态很好，冻存接种数量尽量多一点！2.复苏前先准备好离心管，1毫升冻存细胞放6-8毫升培养基，尽可能大量稀释！3.从液氮罐里拿出细胞后，立即在37度水浴溶，待有绿豆大的冰块时为宜！4.将冻存细胞稀 ...

第一次复苏很多细节没有注意到，又复苏一次状态好了很多，依然有些分化的，应该是我操作的问题。非常感谢您的指点，谢谢^o^

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3楼2014-03-30 08:24:22
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jby2006

银虫 (初入文坛)
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细胞复苏原则是慢东速溶，可尝试多加点培养基。
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4楼2014-03-30 11:30:52
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yjhuan

银虫 (小有名气)
★
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我最近也遇到了同样的问题，请问楼主怎么解决的？复苏出来状态一直不好
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5楼2015-12-10 09:31:45
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笑语盈盈

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yjhuan at 2015-12-10 09:31:45
我最近也遇到了同样的问题，请问楼主怎么解决的？复苏出来状态一直不好

我最后也没解决这个问题，每年寒假回来细胞就复苏不活，暑假时却无此问题，最后是同学给分了一瓶新的，然后就正常了。
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6楼2015-12-10 15:52:36
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七音

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by yjhuan at 2015-12-10 09:31:45
我最近也遇到了同样的问题，请问楼主怎么解决的？复苏出来状态一直不好

复苏后状态不好有时候也是血清的问题，我们实验室之前一直用进口的Gibico的血清，养的细胞培养一段时间后就会长角，最后用的国产的四季青的血清，细胞状态才稳定，但并不是说国产的就好，国产的血清批次不同的话对细胞的效果也是很不同的。个人经验只是一说、、、、
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学习学习学思学思学死学死
7楼2015-12-10 18:58:53
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芳荷恋雨

铜虫 (小有名气)
★
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我复苏细胞时如果离心的话，之后就不换液，如果没有离心的话，也会放到第二天换液。你的这株细胞我没有养过，但是为什么要3小时后换液啊，细胞都还没有适应环境。
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自己选的路，爬也要爬完
8楼2015-12-14 15:29:05
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