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笑语盈盈

金虫 (小有名气)

[交流] RAW264.7细胞复苏总是失败 已有5人参与

三周前其他实验室同学馈赠一株RAW264.7,是在培养瓶拿过来了,养了两周都很好,但是再复苏细胞时却总是无法成功复苏,复苏时先离心再培养的,开始状态很正常,三个小时后百分之七十贴壁,百分之一的长角(此时换一次培养液);六小时后有百分之十的长角,第二天就全部长角了。。。求大神指点!(复苏了三次都是这样)
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笑语盈盈

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 已支 at 2014-03-29 17:35:35
1.确定细胞冻存前状态很好,冻存接种数量尽量多一点!2.复苏前先准备好离心管,1毫升冻存细胞放6-8毫升培养基,尽可能大量稀释!3.从液氮罐里拿出细胞后,立即在37度水浴溶,待有绿豆大的冰块时为宜!4.将冻存细胞稀 ...

第一次复苏很多细节没有注意到,又复苏一次状态好了很多,依然有些分化的,应该是我操作的问题。非常感谢您的指点,谢谢^o^

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-03-30 08:24:22
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已支

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1.确定细胞冻存前状态很好,冻存接种数量尽量多一点!2.复苏前先准备好离心管,1毫升冻存细胞放6-8毫升培养基,尽可能大量稀释!3.从液氮罐里拿出细胞后,立即在37度水浴溶,待有绿豆大的冰块时为宜!4.将冻存细胞稀释轻轻吹打均匀,一般我离心3分钟1000转!5.离心完吹打一定要轻,机械损伤对细胞伤害很大!6.隔天观察细胞状态,最好换一次液!!如果你这些做的都差不多,应该是之前细胞接种时的问题吧~机械损伤比胰酶消化危害还大~
2楼2014-03-29 17:35:35
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jby2006

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
细胞复苏原则是慢东速溶,可尝试多加点培养基。
4楼2014-03-30 11:30:52
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yjhuan

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我最近也遇到了同样的问题,请问楼主怎么解决的?复苏出来状态一直不好
5楼2015-12-10 09:31:45
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